双基因NGF-IREs-BMP2真核质粒转染大鼠BMSCs诱导成骨的实验研究
目的：运用基因工程的手段将双基因真核质粒载体pCDNA3.1-NGF-IRES-BMP2转染入大鼠BMSCs中，研究其诱导成骨后目的蛋白的表达情况。 方法：取三月龄SD大鼠，颈椎脱臼处死后，通过全骨髓培养法分离培养大鼠BMSCs并稳定传代。倒置相差显微镜下观察细胞生长形态，运用流式细胞仪检测大鼠BMSCs表面标志物CD31、CD90。取第三代大鼠BMSCs，分为五组，单基因pCDNA3.1-NGF转染组（A组），单基因pCDNA3.1-BMP2转染组（B组），双基因pCDNA3.1-NGF-IRES-BMP2转染组（C组），空质粒组（D组），阴性对照组（E组）。运用Lipofectamine2000介导将各组基因转染入大鼠BMSCs。western-blot检测目的基因蛋白表达情况，并用BioRad凝胶图像分析系统测定各组灰度值。免疫组织化学染色检测I型胶原蛋白表达含量。茜苏红染色测定各组BMSCs钙结节并计数。数据进行统计学分析。 结果：显微镜观察BMSCs成功分离培养并稳定传代;流式细胞仪测定BMSCs表面标志物，CD90表达阳性，CD31表达阴性;各组基因转染BMSCs后，western-blot、I型胶原免疫组化染色、茜苏红染色钙结节及统计学分析均提示双基因转染组的目的蛋白表达量、I型胶原蛋白表达量、钙结节形成数目均高于单基因转染组、空质粒组以及阴性对照组。统计学分析结果p＜0.05，有显著性差异。 结论：转染双基因pCDNA3.1-NGF-IRES-BMP2组BMSCs可同时表达两种目的蛋白，并能诱导BMSCs向成骨细胞分化，且两者具有协同成骨作用。
骨骼修复;诱导成骨;生物材料;细胞生物学
桂林医学院
硕士
骨外科
贝朝涌
2015
中文
R318.17;R318.08
53
2015-12-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）