肢体缺血后处理对脑缺血再灌注大鼠的GSK3β/MAP2a/b通路的影响机制
目的：通过观察肢体缺血后处理中氯化锂对糖原合酶激酶3β(GSK3β)及其下游微管相关蛋白2(MAP2a/b)的影响。探讨肢体缺血后处理是否通过GSK3β/MAP2a/b信号通路对脑缺血再灌注起保护作用。 方法：制作脑缺血再灌注，肢体缺血后处理及氯化锂干预大鼠模型，选用60只SPF级雄性SD大鼠(220-280g)按随机数字表法分为4组，假手术组（sham）、缺血再灌注组(I/R组)、肢体缺血后处理组(LpostC组)、肢体缺血后处理+氯化锂(GSK3β阻断剂)组（LiCl组）。I/R组:缺血2h之后再灌注24h。LpostC组:缺血2h之后再灌注24h，再灌注的同时进行肢体缺血后处理，双侧股动脉缺血5min，灌注5min，3个循环。LiCl组:再灌注前20min进行腹腔注射LiCl3mmol/kg，其他处置方法与LpostC组基本相同。于大鼠脑缺血再灌注24小时及加药后进行神经功能缺损评分，HE病理形态学染色，测定大鼠脑梗死体积;TUNEL法检测细胞凋亡率;Western blotting法检测P-GSK3β(ser9)，MAP2a/b的蛋白表达。免疫组织化学法测P-GSK3β(ser9)，MAP2a/b免疫阳性细胞率。分析肢体缺血后处理是否通过GSK3β/MAP2a/b对脑缺血起保护作用。 结果：⑴神经行为学评分:假手术组大鼠无明显神经功能缺损，脑缺血再灌注模型组神经功能缺损评分最高，肢体缺血后处理组较低，氯化锂组神经功能缺损评分最低，四组相比统计学有显著差异(P＜0.05)。⑵缺血侧顶叶皮层（尾状核平面）的病理改变:假手术组大鼠脑组织结构正常。缺血再灌注组可见有大片坏死区，坏死区内无神经细胞及神经胶质细胞。肢体缺血后处理组神经细胞变性坏死程度较缺血再灌注组轻，而氯化锂组较前两者则坏死程度更轻。⑶大鼠脑梗死病灶体积:大鼠脑组织在假手术组中无梗死病灶。在缺血再灌注组中最大，在肢体缺血后处理中较缺血再灌注组减少，两者相比有统计学差异(P＜0.05)，梗死面积在氯化锂组中最小，与缺血再灌注组和肢体缺血后处理组相比有统计学差异(P＜0.05)。⑷TUNEL实验中阳性凋亡细胞率:假手术组有少量的凋亡细胞。I/R组凋亡细胞明显增多，肢体缺血后处理组凋亡细胞减少，三组相比有统计学意义(P＜0.05)。氯化锂组与I/R组，肢体缺血后处理组相比凋亡细胞数减少，三组相比有统计学意义。⑸Western blotting实验中缺血侧项叶脑组织中P-GSK3β(ser9)，MAP2a/b蛋白的表达:假手术组可见有P-GSK3β(ser9)蛋白的表达，I/R组脑组织P-GSK3β(ser9）蛋白的表达明显减少，肢体缺血后处理组P-GSK3β(ser9)蛋白的表达增多，氯化锂组P-GSK3β(ser9)蛋白的表达最多，四组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。假手术组有MAP2a/b表达最多，I/R组MAP2a/b表达减少，肢体缺血后处理组表达增多，氯化锂组较肢体缺血后处理组表达增多，四组相比有统计学差异(P＜0.05)。⑹免疫组化中P-GSK3β(ser9)，MAP2a/b免疫阳性细胞数的表达:缺血再灌注组仅有少量P-GSK3β(ser9)免疫阳性细胞表达，与假手术组相比，有统计学差异(P＜0.05)。与I/R组比较，LpostC组、LiCl组P-GSK3β(ser9)免疫阳性细胞数逐渐增加，三组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。假手术组有MAP2a/b大量表达，为正常的神经细胞表达。缺血再灌注组仅有少量MAP2a/b免疫表达，与假手术组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。与I/R组相比，LpostC组免疫阳性细胞率增加，LiCl组MAP2a/b免疫阳性细胞率最多，三组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论：①肢体缺血后处理组能改善神经功能缺损症状，减少脑神经病理组织损伤，减少脑梗死病灶体积，减少凋亡细胞，增加P-GSK3β(ser9)蛋白的表达，MAP2表达逐渐增多，逐渐增加P-GSK3β(ser9)，MAP2a/b免疫阳性细胞。肢体缺血后处理对脑缺血再灌注损伤有保护作用。②大鼠脑缺血再灌注减少P-GSK3β(ser9)，MAP2a/b阳性细胞表达，肢体缺血后处理组增加P-GSK3β(ser9)，MAP2a/b阳性细胞表达，P-GSK-3β(ser9)是GSK-3β的失活形式。肢体缺血后处理抑制GSK3β/MAP2a/b信号通路对脑缺血再灌注起保护作用。
脑缺血;缺血再灌注;神经保护;疗效评价
桂林医学院
硕士
神经病学
刘开祥
2015
中文
R743.31;R457.1
55
2015-12-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）