Nampt在糖尿病发病过程中对肾脏细胞NF-κBp65和Sirt1的调控及相互关系
目的：通过检测糖尿病发病过程中Nampt，NF-κ Bp65，Sirt1基因表达变化，探讨Nampt对NF-κBp65和Sirt1基因的调控作用，为揭示糖尿病肾病的发病机理和新的治疗方法提供理论依据。 方法：⑴应用高浓度葡萄糖（35mmol/L）1640培养基培养NRK-52E细胞，在不同培养时间(0h，24h，48h，72h，96h，120h)提取各组蛋白，用蛋白质印记技术检测细胞内Nampt，NF-κBp65，Sirt1基因的蛋白表达情况;在培养过程中，观察细胞的形态学变化，同时免疫荧光技术检测细胞中Nampt，NF-κ Bp65和Sirt1基因的表达情况。⑵通过2型糖尿病SD大鼠模型研究，应用免疫组化方法检测胰腺和肾脏中Nampt，NF-κ Bp65和Sirt1的蛋白表达，综合评价Nampt与NF-κBp65和Sirt1基因表达的关系，分析其在糖尿病及糖尿病肾病发病之间的作用及其相互关系。 结果：①NRK-52E细胞在高浓度葡萄糖环境中，Nampt随着培养时间延长，表达量明显升高，此时NF-κ Bp65表达也随之增加，而Sirt1的蛋白表达水平则随着Nampt表达的增加而逐渐降低;形态学观察发现，与对照组比较，高浓度葡萄糖培养的NRK-52E细胞，细胞核体积明显变大，细胞呈现出不规则的变化;荧光显微镜下发现，Nampt在细胞内表达明显增加，且胞浆和胞核中均见有表达，NF-κBp65蛋白表达也明显增强，此时Sirt1表达则低于正常糖浓度组;NF-κ Bp65表达随着Nampt蛋白的增加而增加，而Sirt1表达随着Nampt蛋白的增加而降低；②在2型糖尿病模型大鼠的胰腺组织中，在胰岛中Nampt、NF-κ Bp65和Sirt1均见有表达，模型组中Nampt和NF-κBp65表达明显高于正常对照组，而Sirt1的表达低于正常对照组;在肾脏组织中，Nampt，NF-κ Bp65和Sirt1蛋白主要表达于肾小管和肾小球部位部分有表达，其中Nampt和NF-κBp65明显高于对照组，而Sirt1蛋白表达则低于对照组。 结论：⑴在高糖浓度培养的NRK-52E细胞中Nampt、NF-κ Bp65增加，而Sirt1表达则明显降低；⑵在2型糖尿病模型SD大鼠胰腺和肾脏组织中，Nampt， Nampt和NF-κBp65表达增加，Sirt1蛋白表达减少。在糖尿病及糖尿病肾病的发病中，Nampt可能作为关键因子在调节NF-κ Bp65和Sirt1蛋白表达方面发挥中作用。
2型糖尿病;NRK-52E细胞;基因表达;细胞病理学
桂林医学院
硕士
免疫学
冯乐平
2015
中文
R587.1;R361.3
49
2015-12-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）