含砷、汞类矿物中药对小鼠肾脏有机阴离子转运体及首过效应的影响
目的: 研究含砷、汞类矿物中药对小鼠肾脏有机阴离子转运体(Oat1，Oat3)和与首过效应相关联的细胞色素P450(Cyp3a，Cyp2e1)、P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)的影响。 方法: SPF级NIH小鼠，随机分为纯水组、羧甲基纤维素钠(CMC)组、丙磺舒组(50mg·kg-1)、雄黄组(60，15 mg·kg-1)、水飞雄黄组(60，15 mg·kg-1)、朱砂组(120，30 mg·kg-1)和氯化汞(HgCl2)组(0.2，0.05 mg·kg-1)，每组70只，雌雄各半。各组小鼠灌胃相应的供试物，2次/d，连续5天。第六天灌胃供试物1h后，尾静脉注射对-氨基马尿酸（para-aminohippuric acid，PAH，30 mg·kg-1）于1.0、2.5、5.0、7.5、10.0、20.0及30.0 min，分别从每组取10只小鼠安乐处死收集全血并迅速摘取肾脏。 SPF级NIH小鼠，随机分为纯水组、CMC组、利福平组(40 mg·kg-1)、酮康唑组(24 mg·kg-1)、雄黄组(60，15 mg·kg-1)、水飞雄黄组(60，15 mg·kg1)、朱砂组(120，30 mg·kg-1)和HgCl2组(0.2，0.05 mg·kg-1)，每组80只，雌雄各半，灌胃方法同上。第六天灌胃供试物1h后，再灌胃对乙酰氨基酚(acetaminophen，APAP，20 mg·kg-1)于5、15、30、45、60、75、90、120 min，分别从每组取10只小鼠安乐处死收集全血并迅速摘取肝脏和小肠。 用药动学软件(DAS2.0)计算血清中PAH的药动学参数，测定肾切片和肾匀浆中PAH的含量。以红霉素法和氨基比林法测定小鼠肝/肠微粒体中Cyp3a活性，以苯胺法测定小鼠肝微粒体中Cyp2e1活性。测定小鼠血清和肝匀浆液中APAP浓度，用DAS2.0计算血清中APAP的药动学参数，用超微量ATP酶测试盒测定肠匀浆液中P-gp依赖性的ATP酶的活性;用Folin-酚法定量蛋白含量。用实时定量PCR(RT-PCR)测定小鼠肾脏Oat1、Oat3，肝脏Cyp3a11、Cyp2e1及小肠Abcb1bmRNA的表达。 结果: 测定小鼠Oats摄取活性的实验结果:与CMC对照组比较，HgCl2高、低剂量组的t1/2β显著延长（P＜0.01）;雄黄、水飞雄黄、朱砂、HgCl2高、低剂量组的Vd、CL和AUC0-30min均发生显著变化:Vd缩小（P＜0.01）、CL降低（P＜0.01）、AUC0-30min增大（P＜0.05，P＜0.01）;与CMC对照组比较，雄黄、水飞雄黄、朱砂、HgCl2的高、低剂量组肾切片摄取的PAH的量显著降低（P＜0.05，P＜0.01）;比较PAH肾脏AUC1-20min与血清AUC1-20min的比值。与CMC对照组比较，雄黄、水飞雄黄、朱砂、HgCl2的高、低剂量组AUC1-20min间的比值均显著降低（P＜0.05，P＜0.01）。 测定肝脏、肠道微粒体实验结果:无论以红霉素还是氨基比林为底物测定Cyp3a酶活性，雄黄、水飞雄黄、朱砂、HgCl2的高、低剂量组的Cyp3a酶活性均显著高于CMC组（P＜0.05，P＜0.01）。以苯胺为底物Cyp2e1酶活性时，雄黄、水飞雄黄、朱砂、HgCl2的高、低剂量组的Cyp2e1酶活性均显著高于CMC组（P＜0.05，P＜0.01）。 测定小鼠P-gp外排活性的实验结果:与CMC对照组比较，朱砂和HgCl2高剂量组的t1/2(absorption)显著延长(P＜0.05);雄黄、水飞雄黄、朱砂、HgCl2高、低剂量组的Vd、CL和AUC5-120min均发生显著变化:Vd缩小（P＜0.01）、CL降低（P＜0.01）、AUC5-120min增大（P＜0.05，P＜0.01）;与CMC对照组比较，雄黄、水飞雄黄、朱砂、HgCl2的高、低剂量组肝匀浆液中APAP含量显著升高(P＜0.05，P＜0.01);与CMC组比较，雄黄、水飞雄黄、朱砂、HgCl2的高、低剂量组P-gp偶联的ATP酶的活性被显著抑制（P＜0.05，P＜0.01）。 RT-PCR测定结果:与CMC对照组比较，雄黄、水飞雄黄、朱砂、HgCl2的高剂量组肾脏Oat1、Oat3 mRNA均被显著下调（P＜0.05，P＜0.01），肝脏Cyp3a11、Cyp2e1均被显著上调(P＜0.01)和小肠Abcb1bmRNA均被显著下调（P＜0.05，P＜0.01）。 上述各项实验结果:CMC组与纯水组之间均无统计学差异（P＞0.05）。 结论: 探究的含砷、汞类矿物中药（雄黄、朱砂）可能通过抑制OAT1，OAT3导致肾脏的损伤;对肝脏中的CYP3A、CYP2E1和P-gp以及肠道中的CYP3A和P-gp均有明显的药理作用（抑制或诱导），进而调控首过效应。
矿物中药;有机阴离子转运体;细胞色素P450;P-糖蛋白;动物模型;首过效应;药理作用
广州中医药大学
硕士
药理学
奇锦峰
2015
中文
R285.5
81
2015-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）