溃结灵对UC大鼠Th17细胞分化的调节机制研究
本文研究了溃结灵对UC大鼠Th17细胞分化的调节机制。本研究分为三个部分： 第一部分：溃结灵对UC大鼠结肠黏膜中TGF-β1、IL-6、IL-21、RORγt、STAT3、IL-17mRNA的影响。 目的：通过观察溃结灵对UC大鼠模型结肠黏膜TGF-β1、IL-6、IL-21、RORγt、STAT3、IL-17mRNA的影响，并探讨相关作用机制。 方法:采用SD雄性大鼠并制作由三硝基苯磺酸TNBS诱导的UC模型，随机分为UC模型组，正常组，SASP组，溃结灵高、中、低剂组。溃结灵高、中、低剂量和SASP对UC大鼠进行干预，药物治疗结束后处死，刮取黏膜，采用实时定量荧光PCR方法检测结肠黏膜中TGF-β1、IL-6、IL-21、STAT3、RORγt、IL-17mRNA的表达。 结果：溃结灵高剂组和SASP组结肠黏膜中TGF-β1mRNA的表达明显高于模型组(P＜0.05);模型组结肠黏膜中IL-6mRNA明显高于正常组(P＜0.01)，溃结灵高、中剂组和SASP组的基因表达低于模型组(P＜0.01);模型组结肠黏膜中IL-21mRNA明显高于正常组(P＜0.01)，溃结灵高、中剂组和SASP组的基因表达低于模型组(P＜0.01或P＜0.05);模型组结肠黏膜中STAT3mRNA明显高于正常组(P＜0.01)，溃结灵高、中剂组和SASP组的基因表达低于模型组(P＜0.01或P＜0.05);模型组结肠黏膜中RORγt明显高于正常组(P＜0.01)，溃结灵高、中剂组和SASP组的基因表达低于模型组(P＜0.01);模型组结肠黏膜中IL-17mRNA明显高于正常组(P＜0.01)，溃结灵高、中剂组和SASP组的基因表达低于模型组（P＜0.01或P＜0.05）; 第二部分：溃结灵对UC大鼠结肠黏膜中RORγt、STAT3蛋白表达的影响。 目的：STAT3可调节RORγt的表达，进而抑制Th17细胞的分化，RORγt的表达亦随之降低。STAT3为胞质着色，主要表达于黏膜固有层的单个核细胞，中性粒细胞和黏膜上皮细胞中也可见表达，RORγt主要表达于炎症细胞胞核和胞浆中。本实验通过采用免疫组化的方法对其蛋白进行定位和定量分析。 方法：造模、分组、给药，同实验一，采用中性福尔马林固定结肠组织，制作病理切片，采用免疫组化的方法观察各组大鼠结肠中RORγt、STAT3蛋白的表达。 结果：模型组结肠黏膜中RORγt蛋白表达高于正常组(P＜0.01)，溃结灵高、中、低剂组和SASP组的蛋白表达低于模型组(P＜0.01或P＜0.05);模型组结肠黏膜中STAT3蛋白表达高于正常组(P＜0.01)，溃结灵高、中、低剂组和SASP组的蛋白表达低于模型组（P＜0.01或P＜0.05）。 第三部分：溃结灵对UC大鼠结肠黏膜中IL-21蛋白表达的影响。 目的：Th17细胞大量表达IL-21，实验表明IL-21能显著促进Th17细胞分化，IL-21能取代IL-6的作用和TGF-β1诱导Th17细胞分化。本实验通过溃结灵对UC大鼠结肠黏膜中IL-21蛋白表达的影响，并探讨其相关作用机制。 方法：造模、分组、给药，取材同实验一，采用酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测结肠黏膜中IL-21的蛋白表达。 结果：模型组结肠黏膜中IL-21的蛋白表达明显高于正常组(P＜0.05)，溃结灵高、中剂组和SASP组的蛋白表达低于模型组(P＜0.05)。 结论：针对研究结果进行分析，可得:UC模型大鼠中，炎症因子IL-6、IL-21等炎症因子大量表达，激活信号通路关键因子STAT3，从而通过RORγt来促进Th17细胞分化并分泌炎症因子IL-17。经过溃结灵干预后，TGF-β1的表达上调，IL-6、IL-21等炎症因子表达受到抑制，导致RORγt的表达下调，进一步抑制STAT3表达，从而抑制Th17分化和IL-17的分泌。提示溃结灵通过调节上述的因子来影响Th17细胞的分化，从而恢复Th17/Treg平衡，最终达到治疗UC的目的。
溃疡性结肠炎;中药治疗;溃结灵制剂;实验药理
广州中医药大学
硕士
中西医结合基础
杜群
2015
中文
R574.62;R285.5
75
2015-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）