通光散C21甾体化合物增强紫杉醇体内外抗肿瘤作用的实验研究
目的: 通过体内、外实验观察中药通光散(Marsdenia Tenacissima)中分离到的C21甾体苷和苷元类化合物能否增强肿瘤细胞对抗癌药物紫杉醇(paclitaxel)的敏感性，并初步探讨作用机制。 方法: 药效评价:MTT法测定紫杉醇单独、或在无细胞毒浓度的通光散单体成分存在下对人宫颈癌细胞株HeLa、人结直肠腺癌细胞株HCT-15和人乳腺癌细胞株MCF-7增殖的半数抑制浓度(IC50)，评价通光散单体成分对紫杉醇抗肿瘤的体外增效作用;在荷瘤裸鼠模型上测试紫杉醇单独、或与通光散单体成分联用时对HeLa移植瘤生长的抑制效果，评价通光散单体成分对紫杉醇抗肿瘤的体内增效作用。 初步机制探讨:以HeLa细胞为模型，通过PI单染-流式细胞术观察细胞周期，AnnexinⅤ-FITC/PI双染-流式细胞术检测细胞凋亡变化，Western blotting检测凋亡相关蛋白bcl-2、bax、p53和caspase-9的表达情况，探讨通光散单体成分W-9对紫杉醇抗肿瘤作用的增效机制。 结果: (1)四个被测试的通光散C21甾体成分分别为2个C21甾体苷元[11α-O-2-methylbutanoyl-12β-O-tigloyl-tenacigenin B(W-7)、11α-O-2-methylbutanoyl-12β-O-benzoyl-tenacigenin B（W-9）]和2个C21甾体去氧糖苷[marsdenoside A(W-13)和marsdenoside C(W-17)]。 (2)在人宫颈癌细胞株HeLa和人结直肠腺癌细胞株HCT-15模型上，这四个化合物在其无毒浓度下与紫杉醇联用，能显著降低紫杉醇对细胞增殖的半数抑制浓度(IC50)，且作用具有剂量依赖性;但相同条件下四个化合物在人乳腺癌细胞株MCF-7模型上不能降低紫杉醇对细胞增殖的IC50。 (3)在HeLa移植瘤裸鼠模型上，和模型组相比，每日一次、连续10天单独灌胃给予小鼠W-9或W-13(30mg/kg)不能抑制肿瘤的生长，两日一次、连续10天腹腔注射紫杉醇(10mg/kg)对肿瘤的生长有一定的抑制作用，但将W-9或W-13与紫杉醇结合使用时，肿瘤增长速度明显变慢，瘤重明显轻于模型组和紫杉醇单独治疗组(P＜0.001)。 (4)在HeLa细胞模型上，紫杉醇能诱导HeLa细胞发生凋亡，阻断细胞周期于S期。10μM的W-9单独作用于细胞，不能影响细胞周期和细胞凋亡，但在与2.5nM的紫杉醇联合作用时，可明显增强紫杉醇诱导的细胞周期阻滞和凋亡（与紫杉醇单独给药组比P＜0.001）。 (5)10μ M的W-9和2.5nM的紫杉醇单独或联合作用于HeLa细胞48h后离心收集细胞，用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。发现联合给药组的HeLa细胞凋亡率(34.3±1.1％)显著大于紫杉醇单独给药组(14.6±2.7％)和W-9单独给药组(7.3±0.2％)的凋亡率之和(P＜0.001)。 (6)Western blotting结果显示在2.5nM的紫杉醇单独或联合5μM的W-9作用于HeLa细胞，都出现bcl-2表达下调、Bax和p53表达上调以及caspase-9激活，但紫杉醇和W-9联合组作用更明显，且Bax/Bcl-2比率(P＜0.05)和p53基因的表达(P＜0.01)都比紫杉醇单独组显著增高。 结论: 被测试的四个通光散中的Tenacigenin B酯类衍生物能增强紫杉醇对HeLa和HCT-15细胞的抑制作用，并能增强紫杉醇对HeLa实体瘤的抑制作用;但是在相同条件下四个化合物不能增强紫杉醇对MCF-7细胞的抑制作用。W-9对紫杉醇的增效作用可能是通过线粒体途径共同发挥作用，改变线粒体外膜的通透性，来诱导HeLa细胞的凋亡。
中药通光散;C21甾体化合物;紫杉醇;化疗增效剂;抗肿瘤作用
广州中医药大学
硕士
中药学
沈小玲
2015
中文
R283.624;R979.1
61
2015-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）