补肾活血汤促进老年性桡骨远端骨折愈合的实验与临床研究
目的: 在中医“肾主骨”以及骨折“瘀去、新生、骨合”理论指导下，探讨补肾活血汤促进骨折愈合的机理。通过对目前最新文献进行研究，观察补肾活血汤对老年性桡骨远端骨折的临床疗效，同时进行动物、细胞实验深入探索促进骨折愈合的方法，为中医药治疗骨缺损、骨折延期愈合或骨不连、骨坏死及骨折长期制动后出现的废用性骨质疏松等难治性骨病提供新思路和理论依据。 方法: 一、文献研究 间充质干细胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)是骨折愈合过程中最重要的细胞基础，具有强大的自我增殖、多向分化、损伤归巢、组织修复能力，由于其可以向成骨、软骨细胞分化，促进骨折的愈合而成为目前研究的热点。趋化因子是一类可以趋化细胞定向迁移的小分子分泌蛋白，近年来发现趋化因子及其受体具有诱导MSCs向损伤、炎症、缺血等部位迁移归巢、参与组织的修复的作用。因此，归纳、总结诱导MSCs定向迁移的趋化因子，初步了解其作用机制，对于探索促进骨折愈合的方法具有积极意义。 二、实验研究 制备SD大鼠股骨中段骨折模型，补肾活血汤灌胃治疗7天、14天、21天后分离、培养骨折端MSCs，经免疫荧光，成骨、成脂分化鉴定，传至第3代采用Transwell体外迁移实验检测补肾活血汤对骨折端MSCs体外迁移的影响，Western Blot、qPCR检测MSCs趋化因子表面受体CCR2的表达。 三、临床研究 按随机数字表法将60例老年性桡骨远端骨折患者分为治疗组、对照组，骨折复位、稳定固定后，治疗组予补肾活血汤内服4周，对照组不服中药，其他治疗与治疗组保持一致。通过定期X-ray复查进行桡骨远端骨折愈合评分(Radius union scoringsystem，RUSS)，确定骨折愈合时间，骨折愈合后采用Gartland-Werley、PRWE(patient-rated wrist evaluation)评分标准对腕关节功能进行评价。 结果: 一、文献研究 趋化因子及其受体多渠道的相互作用的方式意味着MSCs在移行的每一阶段都受到单个或多个趋化因子及其受体的影响，阻断趋化因子配体与受体结合这一途径可导致MSCs移行方向的改变或移动受阻。同时，我们在许多趋化因子受体激活剂的实验研究中可以看到，往往单个趋化因子的激活就能明显地促进MSCs迁移归巢。因此，明确各种趋化因子在骨折微环境中是否有表达以及表达的规律如何，不但可以筛选出诱导MSCs向骨折部位定向迁移的关键趋化因子，也可以进一步阐明内源性MSCs向骨损伤部位定向迁移归巢促进骨修复的相关机制。同时，如果能够掌握相关趋化因子的表达规律和作用机制，运用中药补肾活血汤调节相关趋化因子及其受体的表达，将为中医药治疗骨折、骨缺损，促进骨折愈合带来新的前景。 二、实验研究 骨折端MSCs经细胞表面抗原免疫荧光以及成骨、成脂分化能力鉴定，可证实为间充质干细胞。补肾活血汤治疗后第7天、14天，骨折端MSCs体外迁移能力明显加强，与模型组、对照组比较，差异有统计学意义。第21天，骨折端MSCs体外迁移能力有所减弱，与模型组比较，差异无统计学意义。Western Blot、qPCR结果显示，补肾活血汤治疗第7、14天，MSCs表面受体CCR2表达均有上升，与模型组、对照组比较，差异有统计学意义。第21天，治疗组与模型组比较，差异无统计学意义。 三、临床研究 RUSS评分，第2、4、6周治疗组与对照组比较，差异有统计学意义，第8周两组比较，差异无统计学意义;治疗组（5.18±1.02周）与对照组(5.97±1.02周)骨折愈合时间比较，差异有统计学意义;Gartland-Werley评分，治疗组(6.18±2.70)与对照组(8.03±2.18)两组比较，差异有统计学意义;PRWE评分，治疗组(14.61±4.18)与对照组(18.72±3.84)，两组比较，差异有统计学意义。 结论: 一、多种趋化因子及其受体的结合可以诱导MSCs的迁移归巢从而参与骨折的损伤修复，研究其表达规律及其作用机制，对于探索促进骨折愈合的方法具有积极意义。 二、补肾活血汤可以促进大鼠骨折愈合过程中MSCs的体外迁移，其相关机制可能与上调MSCs表面受体CCR2的表达有关。 三、补肾活血汤具有促进老年性桡骨远端骨折愈合、缩短骨折愈合时间、改善骨折后腕关节功能的作用。
补肾活血汤;桡骨远端骨折;临床疗效
广州中医药大学
硕士
中医骨伤科学
罗毅文
2015
中文
R274.11;R283.661
49
2015-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）