琼玉膏干预衰老大鼠模型的脾脏差异蛋白研究
目的: 对衰老机理的研究是现代老年基础医学研究中一项重要课题，现已有大量实验数据成为众多衰老机制学说立足的证据。本实验将以D-半乳糖致衰老雄性SD大鼠的脾脏作为实验的研究对象，应用琼玉膏方进行干预，运用蛋白质组学技术，对脾脏总蛋白进行差异分析，分析琼玉膏作用于的差异蛋白的蛋白定量、功能性质，从而解释琼玉膏在延缓衰老中的作用机理，为开发琼玉膏制剂开创实验基础和理论依据。 方法: 将42只6月龄SD雄性大鼠随机分为3组，空白组、模型组、药物组，每组14只，空白组采用腹腔注射生理盐水300mg/kg·d，灌胃蒸馏水5.83ml/kg·d;模型组采用腹腔注射D-半乳糖300mg/kg·d，灌胃蒸馏水5.83ml/kg·d;药物组采用腹腔注射D-半乳糖300mg/kg·d，灌胃琼玉膏5.83ml/kg·d.连续40天后，进行血清、心脏和脾脏组织提取。利用iTRAQ技术进行蛋白质组学研究，提取总蛋白、对蛋白质进行酶解、肽段标记、肽段除盐、质谱鉴定，运用Mascot搜库对蛋白质进行定性定量分析，再从Uniprot-SwissProt_Rat库中查询蛋白质定性信息，鉴定总蛋白，分析组间差异蛋白的功能及属性。 结果: 1.建立了D-半乳糖致衰亚急性大鼠模型 2.与空白组相比，模型组大鼠血清MDA含量较高，两组大鼠间的血清MDA含量对比有显著差异，具有统计学意义(P＜0.05);与模型组大鼠相比，药物组大鼠血清MDA含量较低，有显著性差异，具有统计学意义(P＜0.01)。 3.与空白组相比较，模型组大鼠的心脏组织SOD含量较低，两组大鼠间的心脏组织SOD含量对比有显著差异，具有统计学意义(P＜0.05);与模型组大鼠相比，药物组大鼠心脏组织SOD含量较高，有显著性差异，具有统计学意义(P＜0.05)。 4.运用iTRAQ蛋白质组学技术，比较模型组和药物组的脾脏组织，发现共有18种蛋白质的表达量在组间发生了变化:药物组与模型组相较，上调蛋白7个，包括Δ1-二氢吡咯-5-羧酸脱氢酶，线粒体、高尔基SNAP受体复合物1、CDC42效应蛋白1、乳腺癌易感基因1型、C型凝集素结构域家族11成员A、NGFI-A结合蛋白1、线粒体解偶联蛋白3;药物组与模型组相比，下调蛋白11个，包括蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型6、丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶PP1、烟酰胺磷酸核糖转移酶、钙调磷酸酶B同源蛋白1、E3泛素蛋白连接酶Cbl-b、磷酸肌3-磷酸、冠蛋白-7、Endophilin-B2、G蛋白信号调节蛋白1、Uncharacterized protein C4orf36 homolog、纤维调节素。 结论: 通过对大鼠血清MDA和心脏组织SOD的检测分析，确定建立了成功的亚急性衰老大鼠模型。在对模型组和药物组脾脏差异蛋白的分析中发现这组差异性蛋白主要参与在造血过程，细胞分裂，能量代谢、糖代谢、脂代谢，免疫调节，纤维形成，细胞骨架及各细胞器的形成和稳定，细胞分化、增殖、修复和凋亡等途径当中。这一步，为进一步筛选琼玉膏作用的靶蛋白提供基础。
琼玉膏;延缓衰老;蛋白质组学;差异蛋白;衰老机理;动物模型
广州中医药大学
硕士
中医学
刘焕兰
2015
中文
R256.3;R283.621
50
2015-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）