基于骨代谢探讨肾阴虚证与肾阳虚证PMOP的差异及两种补肾法的干预机制
目的: 分析绝经后骨质疏松症(Postmenopausal osteoporosis，PMOP)中属于肾阴虚证与肾阳虚证患者临床基本资料、骨密度和骨标志物四项等指标，探讨两种证型患者间的差异。 基于Ⅰ型胶原合成、交联与基质矿化探讨补肾阴法与补肾阳法治疗PMOP的疗效及其作用机制的差异。 方法: 选择于广州中医药大学第一附属医院住院治疗，并诊断为PMOP的患者，根据中医证型诊断标准纳入肾阴虚证与肾阳虚证患者，收集两种证型患者年龄、绝经年龄、绝境年限、体重、身高、BMI等临床资料，并检测患者骨密度(Bone mineraldensity，BMD)、骨矿含量(Bone mineral content，BMC)、T值、Ⅰ型前胶原氨基端延长肽(Procollagen I N-terminal peptide，PINP)、β-Ⅰ型胶原羧基末端肽(β-cross linked C-telopeptide of typeⅠ collagen，β-CTX)、N端骨钙素(N-MID)、25-羟维生素D（25-OH Vitamin D）。采用独立样本t检验比较两种证型患者间各临床资料及相关指标间的差异。 150只雌性SD大鼠随机分为五组:模型组、假手术组、西药组、补肾阴组和补肾阳组。建立双侧大鼠卵巢切除模型，三个月后，给予药物灌胃干预。西药组予福善美、补肾阴组予六味地黄丸、补肾阳组予桂附地黄丸、假手术组和模型组予以生理盐水。药物干预三个月后进行指标检测，采用Lunar双能X线骨密度仪检测大鼠股骨近端骨密度，使用骨组织石蜡切片HE染色法观察大鼠股骨近端松质骨的组织形态学，采用Elisa法检测大鼠血清骨代谢标志物骨组织特异性碱性磷酸酶(Bone-specificalkphase，B-ALP)、PINP、NTX和CTX的含量，采用RT-PCR法检测大鼠骨组织中调控Ⅰ型胶原合成(COLIA1、COLIA2)，Ⅰ型胶原交联(Lhx9)和基质矿化(Bglap、Ibsp、Smad3、Runx-2)的相关基因的表达情况。采用单因素方差分析探讨各组间相关指标的差异。 成果: 共纳入61例汉族PMOP症患者，其中诊断为肾阴虚证者28例，肾阳虚证者33例。肾阴虚证患者与肾阳虚证患者在年龄、绝经年限、体重、身高、BMI方面的差异采用独立样本t检验，结果示两组患者在各项基线资料上的差异无统计学意义(P＞0.05）。以BMI等于25作为分类标准，对患者进行分类，其中肾阴虚组患者BMI大于等于25的数量多于肾阳虚组，两组间差异的比较采用卡方检验，结果示，两组间体重超重人数所占比例的差异具有统计学意义（P＜0.01)。两组间BMD和BMC的比较采用独立样本t检验，统计结果示两组间BMC的差异无统计学意义(P＞0.05)。两组间BMD的差异具有统计学意义(P＜0.05)，说明补肾阴组的BMD明显高于补肾阳组。β-CTX、N-MID、25-OH VitD三项指标在两组间的差异无统计学意义（P＞0.05）。两组间PINP水平的差异具有统计学意义（P＜0.05），说明肾阴虚组的PINP水平明显大于肾阳虚组。 大鼠卵巢切除后，模型组骨密度明显低于假手术组（P＜0.05），给予药物（福善美、桂附地黄丸、六位地黄丸）干预后大鼠骨密度明显高于模型组（P＜0.05），西药组骨密度明显高于中药组骨密度（P＜0.05），补肾阳组和补肾阴组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。在各组大鼠股骨近端骨组织形态学比较中，与假手术组相比，模型组骨小梁数量减少，排列不齐，间隙增宽，可见断裂导致的骨性连接缺失。药物（福善美、桂附地黄丸、六位地黄丸）干预后，与模型组相比，骨小梁数量增多，排列整齐，间隙变窄，无可见断裂。与假手术组相比，模型组中基质矿化相关基因Lhx9的表达明显降低(P＜0.05)。药物干预组中，补肾阳组的胶原合成相关基因COLIA1的表达较假手术组明显增高（P＜0.05），西药组和补肾阴组中COLIA2基因的表达较模型组明显增高（P＜0.05)，补肾阳组中Lhx9基因的表达较模型组明显增高（P＜0.05）。与西药组相比，补肾阳组中COLIA1和Lhx9基因的表达明显增加（P＜0.05）。补肾阳组和补肾阴组相比，COLIA1和Lhx9基因的表达明显增高（P＜0.05），COlIA2明显降低（P＜0.05）。与假手术组相比模型组中Bglap和Runx-2基因的表达明显降低（P＜0.05）。药物干预组中，与模型组相比，西药组和补肾阳组Bglap的表达明显增高（P＜0.05），补肾阴组Ibsp的表达明显增高（P＜0.05），三组的Smad3的表达均明显增高（P＜0.05）。与西药组相比，补肾阳组的Smad3基因与补肾阴组的Ibsp基因表达均明显增高（P＜0.05）。和补肾阴组相比，补肾阳组中Bglap基因的表达明显增高（P＜0.05），Ibsp基因的表达明显降低(P＜0.05)。 结论: 肾阴虚证与肾阳虚证PMOP患者在BMI、BMD及骨标志物PINP等方面存在着明显差异，肥胖及骨形成速率的增加可能是肾阴虚证患者BMD明显高于肾阳虚证患者的可能原因。 补肾阴法和补肾阳法可通过提高去势大鼠骨密度、改善骨组织结构的破坏有效治疗大鼠PMOP症。两种补肾法的干预可能是通过调节骨组织代谢并调控Ⅰ型胶原合成、交联与基质矿化相关基因的表达发挥治疗作用。同时，补肾阴法和补肾阳法的具体作用机制存在明显差异。
绝经后骨质疏松症;肾阴虚证;肾阳虚证;补肾法;骨代谢
广州中医药大学
博士
中医骨伤科学
黄枫
2015
中文
R681.1;R289.1
75
2015-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）