MiR-1285对胰腺癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制
胰腺癌早期诊断困难、恶性程度高，是预后最差的恶性肿瘤之一，5年生存率低于7％。MiRNAs因可同时参与肿瘤的增殖、凋亡、耐药及侵袭等多个功能通路的调控而受到广泛关注。miR-1285属于miR-612/1285/3187-5p簇中的一员，目前只有在肝癌和肾细胞肾癌中有所报道，但其在胰腺癌中的调控机制仍不明确，因此我们将miR-1285作为本研究的研究对象，深入研究其对胰腺癌增殖、周期、化疗敏感性、侵袭、迁移、凋亡等恶性生物学行为的影响，并寻找其靶基因，探索其调控机制。 YAP1蛋白是Hippo信号通路的主要效应因子之一，近两年来大量研究证实其在多种恶性肿瘤中均发挥促癌作用。 目的: 1.明确miR-1285对胰腺癌细胞株增殖、周期、化疗敏感性、侵袭、迁移、凋亡等表型的调控作用; 2.明确miR-1285的靶基因; 3.初步探索miR-1285及靶基因的下游信号通路。 方法: 本研究首先通过实时定量PCR（探针法）检测检测miR-1285在各细胞系中的表达量，并选取细胞株作为研究对象。随后，通过脂质体瞬时转染法改变细胞内源性miR-1285的表达后，采用CCK-8细胞增殖实验检测miR-1285对胰腺癌细胞增殖能力和化疗敏感性的影响，采用PI单标记流式细胞术检测细胞周期，采用transwell法检测细胞迁移和侵袭能力，采用AnnexinⅤ/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡，验证miR-1285对胰腺癌细胞系恶性生物学行为的影响。随后，通过生物信息学数据库预测miR-1285的靶基因，将多个数据库预测到的结果进行比对，并实时定量PCR（染料法）和western blot法分别检测靶基因mRNA和蛋白的表达，同时进一步验证miR-1285-YAP1的下游效应蛋白的表达水平。 结果: 1.MiR-1285在胰腺癌耐药株中较亲本株低表达; 2.体外试验中，miR-1285可显著抑制胰腺癌细胞增殖，抑制胰腺癌细胞G1→S期转化，增加吉西他滨化疗敏感性，抑制细胞迁移和侵袭能力，促进胰腺癌细胞凋亡; 3.MiR-1285的靶基因为YAP1，可能通过抑制YAP1 mRNA翻译的途径抑制YAP1蛋白表达; 4.MiR-1285-YAP1下游通路蛋白包括，EGFR、β-catenin、Bim、PTEN等。结论: 1.MiR-1285通过下调YAP1蛋白表达，在胰腺癌细胞株中发挥抑癌作用; 2.EGFR、β-catenin、Bim、PTEN等蛋白参与miR-1285-YAP1对胰腺癌细胞恶性表型的调控。
胰腺癌;小分子RNA;YAP1蛋白;化疗耐药;细胞恶性;生物学行为;抑癌作用
中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院
博士
临床医学
张太平
2015
中文
R735.9
93
2015-11-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）