多发性肌炎/皮肌炎外周血单个核细胞microRNA表达谱分析
目的: (1)筛选并验证与多发性肌炎(polymyositis,PM)和皮肌炎(dermatomyositis,DM)相关的外周血microRNA(miRNA)标志物。 (2)分析PM/DM患者血清中肌炎相关抗体(myositis associated antibodies,MAAs)和肌炎特异性抗体(myositisspecific antibodies,MSAs)的阳性率以及与临床的相关性。 (3)探索PM/DM患者住院死亡相关危险因素。 方法: (1)通过miRNA表达谱芯片筛选未经治疗的PM/DM患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中差异性表达的miRNA。通过文献检索及生物信息学分析,对差异表达的miRNA进行进行靶基因预测及信号通路分析,挑选出与PM/DM发病相关的miRNA进行扩大样本的real-time PCR验证,并分析其表达水平与临床特征及实验室指标的相关性。应用real-time PCR方法探索差异表达miRNA的靶基因在PBMC中的表达水平。 (2)回顾性收集北京协和医院诊治的PM/DM患者228例,收集患者住院及门诊病案记录的临床资料及血清MAAs、 MSAs检测结果。分析每种MAAs和MSAs的阳性率,并将患者根据每种抗体分为抗体阳性组和阴性组,比较两组间临床资料的差异,分析抗体和临床的相关性。 (3)回顾性分析北京协和医院住院死亡的45例PM/DM患者,以90例存活患者作为对照,收集两组患者的住院病历资料,进行二元logistic回归筛选和住院死亡相关的危险因素。 结果: (1)对6例未经治疗的PM/DM患者及3例健康对照(health controls,HC)的PBMC进行miRNA芯片检测,筛选出38条异性表达的miRNA,其中24条表达上调,14条表达下调。结合miRNA差异表达倍数、表达丰度,通过文献检索和生物信息学分析,挑选出hsa-miR-320a、hsa-miR-335-3p、hsa-miR-34a-5p、hsa-miR-454-3p进行进一步验证。通过34例PM/DM患者及20例HC的real-time PCR证实hsa-miR-34a-5p在PM/DM组PBMC中较HC组表达显著上调,相对表达量(relativequantity, RQ)为3.20(1.87,9.24)vs.1.68±0.91, P=0.001。 hsa-miR-320a、hsa-miR-335-3p、hsa-miR-454-3p在两组间表达水平无显著差异。亚组分析中,hsa-miR-34a-5p的表达水平在DM组、肺间质病变(interstitial lung disease,ILD)组和DM-ILD组表达较PM组、无肺间质病变(non-ILD)组、DM-nonILD组显著上调,RQ值分别为4.81(2.39,10.92) vs.1.45±0.89,P=0.001;5.85(2.66,13.22)vs.1.94(1.36,3.13),P=0.001;6.32(3.11,13.32) vs.3.66±2.88,P=0.012。 Real-timePCR验证hsa-miR-34a-5p的靶基因SIRT1在PBMC中的表达量,PM/DM组较HC组显著下调(RQ值0.73±0.37 vs.1.23±0.38,P<0.001)。 (2)PM/DM患者血清中存在多种自身抗体,MAAs中抗Jo-1抗体阳性率为13%(30/224),抗Jo-1抗体阳性组出现发热、技工手、ILD的比例显著高于阴性组(分别为57%vs.37%,37%vs.20%,93%vs.66%,P<0.05)。抗Mi-2抗体在DM中阳性率为7.2%(5/69),抗SRP抗体、抗PL-7抗体和抗PL-12抗体在PM/DM中阳性率分别为7.5%(4/53)、2.2%(2/91)、2.2%(2/91),54例患者中未发现抗EJ抗体或抗OJ抗体阳性者。MAAs中抗Ro52抗体阳性率为48%(85/177),抗体阳性组发生Gottron征、发热、关节痛/关节炎、ILD的比例显著高于阴性组(分别为58%vs.41%,50%vs.27%,49%vs.29%,88%vs.54%,P<0.05)。抗SSA抗体、抗PM-Scl抗体和抗Ku抗体阳性率分别为14%(31/215)、2.4%(4/169)、1.1%(1/91)。抗SSB抗体(1.9%,4/214)、抗RNP抗体(2.3%,5/215)、AMA-M2(4.8%,8/166)均与心脏受累相关,抗体阳性组发生心肌受累或心率失常的比例显著高于抗体阴性组(50%vs.7.2%,40%vs.4.8%,50%vs.3.8%,P<0.05)。此外抗RNP抗体还和肺动脉高压相关,抗体阳性组发生肺动脉高压的比例显著高于抗体阴性组(60%vs.7.6%,P=0.001)。 (3) PM/DM患者住院死亡的主要死因为肺部感染(44%)、ILD进展(18%)、ILD进展合并肺部感染(20%),通过二元logistic回归分析发现肺部感染(0R187.2,95%CI25.8-1356.4,P<0.001)、心肌受累(0R35.0,95%CI1.2-1054.9,P=0.041)、Gottron征(0R13.2,95%CI2.6-67.0,P=0.002)、ESR增快(0R9.9,95%CI2.0-49.0,P=0.005)是PM/DM患者住院死亡的独立危险因素。 结论: (1) PM/DM患者PBMC中存在差异性表达的miRNA,其中hsa-miR-34a-5p表达显著上调且与ILD相关,其靶基因SIRT1表达显著下调,hsa-miR-34a-5p有可能参与PM/DM合并ILD的发病,有可能成为PM/DM新的血清标记物。 (2)PM/DM患者血清中存在多种自身抗体,且与特定的临床表现相关,是疾病诊治中重要的参考指标。 (3)PM/DM住院死亡率高,肺部感染、心肌受累、Gottron征、ESR增快是患者住院死亡的独立危险因素。
多发性肌炎;皮肌炎;单个核细胞;microRNA表达谱;肌炎特异性抗体;住院死亡;危险因素
中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院
博士
临床医学
曾小峰
2015
中文
R593.26;R363.25
72
2015-11-02(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)