EGFP突变G719X与非小细胞肺癌——从基础到临床
背景:肺癌是世界范围内癌症致死的首位病因。以表皮生长因子受体为靶点的小分子酪氨酸激酶抑制剂(EG FR-TKIs)，在含特定EGFR基因突变肺癌患者中取得了显著的用药反应性以及较好的临床疗效。EGFR基因突变中，以19号外显子上缺失突变delE19，及21号外显子上点突变L858R，突变率最高，对TKIs药物反应最好。相反的，T790M点突变是最常见的TKIs耐药突变。除上述突变外，EGFR基因其他位点突变，如G719X（X代表A/S/C）、L861Q、S768I等，临床上突变率较低，且常常倾向于以联合突变的形式存在。充分认识这些突变基因与非小细胞肺癌发生的关系，以及含有这些突变基因的患者对TKIs药物的反应性，可以让我们更充分的认识肺癌发病机理，并指导临床实践。 方法与对象:本文克隆并构建含EGFR野生型及L858R、G719A、G719S、G719A+L861Q联合突变基因的载体，通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统，从昆虫细胞sf9中表达并纯化出野生型及突变蛋白。尝试通过表面等离子共振(SPR)技术研究蛋白与TKIs亲和力，通过商品化试剂盒探索突变蛋白的激酶活性以及TKIs对激酶活性的抑制作用。同时，回顾全国5125例在2009年至2012年接受EGFR基因检测的患者，和北京协和医院489例2010年至2014年接受EGFR基因检测的患者，收集其中含G719X基因突变的患者包括性别、年龄、吸烟史、病理类型、治疗措施、肿瘤分期、无进展生存期和总生存期在内的临床资料，分析G719X突变患者的临床特征及对治疗的反应性。 结果:通过研究我们成功分离并纯化了野生型及含L858R、G719A、G719S、G719A+L861Q突变的EGFR酪氨酸结构域蛋白;通过蛋白激酶实验测得10uM/ml的各种蛋白其磷酸化底物多肽分子比例分别为:G719A+L861Q70.3％; L858R42.69％; G719A26.67％; G719S22.15％，Wt12.34％。全国5125例患者中，G719X突变49例，突变率1.0％，其中G719A占63.3％，G719S占24.5％，G719C占12.2％，联合突变共16例，占32.7％。而协和医院489例患者中，G719X突变共13例，突变率为2.6％，其中G719A占46.2％，G719S占23.1％，G719C占30.8％，联合突变共6例，占46.2％。在接受随访的患者中，ⅢA-Ⅳ期的患者（5名）使用TKIs类药物获得5-22个月的无进展生存期，总生存期均在10个月以上。 结论:联合突变G719A+L861Q突变蛋白激酶活性大于G719A，G719A大于G719S，相对应的临床数据中，G719A突变非小细胞肺癌患者多于G719S和G719C。正是由于联合突变可以增加EGFR蛋白的激酶活性，因而G719X突变常常和其他非常见突变联合出现在非小细胞肺癌患者中。含有G719X单突变或联合突变非小细胞肺癌患者使用TKIs可获得5-22个月的无进展生存期，及10个月以上总生存期，具体疗效及和标准含铂二联化疗效果对比尚需大规模临床研究证实。
非小细胞肺癌;G719X突变;G719A基因;L861Q联合突变;表面等离子共振技术;靶向治疗
中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院
博士
临床医学
李泽坚;李单青
2015
中文
R734.2;R730.231
73
2015-11-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）