肝脏局灶性结节性增生的全外显子测序研究
背景：肝脏局灶性结节性增生（Focal nodular hyperplasia，FNH）是临床中第二高发的良性肝脏肿瘤，仅次于肝血管瘤，女性人群的发病率明显高于男性，男/女比例在1∶8-1∶12，并且女性患者的年龄主要分布于30至50岁之间。大多数FNH患者无明显临床症状，相应病灶通常是在腹部影像学筛查时偶然发现，即使部分患者有腹痛症状，但其与病变本身是否有直接关系目前尚无定论。经典FNH组织病理学特点为:以纤维瘢痕为中心，由呈放射状的纤维板性隔膜分割而成的无包膜性肝细胞增生性结节。中央纤维瘢痕区通常含有管径大小不同的异常血管以及增生胆小管。而非典型FNH约占到总病例数的20％，共同特点为无中央纤维瘢痕性结构，其中包含三种亚型分别为毛细血管扩张型（Telangiectatic FNH，tFNH）、增生腺瘤混合型和非典型细胞型。FNH的病生理机制考虑是由已有的血管结构紊乱所致的增生性改变，目前认为其本身并无潜在恶变风险。分子生物学方面的研究认为100％典型FNH具有多克隆性，75-100％ tFNH与100％肝细胞腺瘤具有单克隆性。临床上，非典型FNH与肝细胞腺瘤、纤维板层状肝细胞肝癌较难鉴别。 二代测序技术是新一代高通量测序技术，具有高灵敏度、高测序效率、相对低成本的优势。全外显子组测序基于二代测序技术平台，可以全面筛查具有编码蛋白功能的全外显子组内的突变情况，对肿瘤学研究有重要的突破作用。 目的：通过全外显子测序技术，对FNH病变的全外显子组进行全面筛查，期望可以发现特异的突变，对FNH的病因、病生理机制、生物学特性或者与其他肝脏病变的鉴别中有一定提示作用。 FNH虽为第二高发的肝脏良性肿瘤，但其发病率仍相对较低。少见肿瘤中可能会发现特异的基因突变。以少见肿瘤的特异突变为切入点，研究特异基因的功能，进而推广到其他肿瘤中验证该基因在肿瘤发生机制中的作用，期望对肿瘤学机制研究能有一定的提示作用。 材料和方法： 1.病例收集2011年至2014年由中国医学科学院肿瘤医院腹部肝胆外科手术切除肝脏局灶病变，术后病理诊断为FNH的病例5例。收集相应肿瘤组织标本及对照全血标本。 2.全外显子组测序实验根据全外显子组测序的规范流程，完成gDNA提取、配对验证、建立DNA文库、外显子富集、上级测序、生物信息学分析的实验步骤。 3.数据分析 通过复习文献，根据生物学功能、突变频率等因素进一步总结选出感兴趣的候选基因。 4.验证 对候选基因进行PCR/Sanger验证。 结果：全外显子组测序生物信息分析结果显示5例FNH标本中发现158个突变，选出4个候选基因:ARID2、EGFR、TRPS1、DAX，其中TRP S1在2例标本中检测到2个不同突变。对这5个突变进行了PCR/Sanger验证，得到了其中4个突变的阳性验证结果，包括ARID2基因14号外显子的错义突变、EGFR基因6号外显子的移码突变、TRPS1基因3号外显子的错义突变及其5号外显子的终止密码子获得突变。 结论：TRPS1基因在2例标本中均发现突变，突变频率较高，与FNH发病机制相关可能性大。相关研究提示TRPS1基因的表达具有抗纤维化的作用，而典型FNH的主要病理表现是中央纤维瘢痕，两者之间可能存在相关性，需进一步扩大样本量以及相关功能学研究进行作证。
肝脏局灶性结节性增生;良性肝脏肿瘤;基因突变;全外显子测序;病理生理;鉴别诊断
中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院
博士
临床医学
焦宇辰
2015
中文
R735.7;R730.23
73
2015-11-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）