腺苷1型受体在顺铂致急性肾损伤中的作用及机制初探
背景：顺铂(cisplatin)是临床广泛使用的实体肿瘤化疗药物。但因肾毒性限制了其临床应用。近年来，随着肿瘤发病率的攀升和人口老龄化特点的日渐突出，肿瘤患者中急性肾损伤(acute kidney injury，AKI)的发病率高达12_26％。顺铂主要通过细胞死亡、炎性反应以及肾脏血流动力学变化等引起AKI甚至慢性肾功能不全[3]。如何根据顺铂致AKI的临床特点和发病机制采取针对性强的预防和治疗策略广受关注。腺苷及其Ⅰ型受体(adenosine A1 receptor，A1AR)不仅能够通过收缩入球动脉调节肾小球滤过率和肾内血流动力学变化，还能够参与炎症反应、氧化应激、坏死和凋亡等病理过程的调控㈨。但文献中A1AR在顺铂致AKI中的作用存在争议。A1AR是通过调节肾血流变化参与顺铂致AKI，还是通过调控细胞死亡或炎性反应发挥作用并不明确。因此探讨A1AR是否参与顺铂致AKI及其具体机制具有积极的临床意义。 目的： 1.回顾性观察以顺铂为主要化疗方案的肺癌患者AKI的发生情况，分析其发生AKI相关的因素，探究AKI对患者预后的影响; 2.建立顺铂致AKI小鼠动物模型，观察细胞凋亡标志物水平变化，了解腺苷及腺苷1型受体是否参与AKI的发生和发展; 3.在腺苷1型受体基因敲除(A1AR-/-)小鼠中建立顺铂致AKI模型，探究A1AR是否通过调节肾脏血流动力学和细胞凋亡发挥作用。 方法： 1.纳入2012年5月-2013年4月在北京协和医院进行化疗且临床和病理资料完整的479名肺癌患者，收集其临床资料，顺铂导致AKI的发生情况。采用病例-对照方法研究与AKI发生相关的临床因素。随访3月，观察其对患者在院死亡率的影响。 2.选用8-10W C57BL/6J雄性小鼠一次性腹腔注射顺铂溶液（25mg/kg）建立顺铂致AKI模型。监测小鼠血压、心率及体重变化，顺铂注射后24h，72h分批处死小鼠，留取血标本，测定血肌酐、尿素氮;行肾组织HE和PAS染色，进行肾小管坏死评分;肾组织肾素(renin)水平免疫组化检测;Western Blot检测A1AR、腺苷2b型受体(A2bAR)的表达水平， Real-tiime PCR评价A1AR、腺苷合成酶CD73、凋亡相关指标Bcl-2 associatedⅩ(Bax)的表达水平。 3.建立A1AR-/-小鼠顺铂致AKI模型。观察小鼠血压、心率及体重变化，顺铂注射后24h处死小鼠，留取血标本和肾组织，评价肾素、CD73、A2bAR、Bax的表达水平。 4.统计方法:连续变量用均值±标准差表示，组间差异检验根据是否服从正态性分布选用t检验或秩和检验;组内差异检验用重复测量资料的方差分析，相关因素分析用logistic回归分析。 结果： 1.AKI是肺癌化疗患者在院死亡的独立危险因素。 肺癌化疗患者AKI的发病率为9.19％，显著高于临床诊断率。化疗前低钠血症和使用抗生素是AKI相关的危险因素。AKI患者3个月内的在院死亡率为18.18％，为非AKI患者的近6倍(P＜0.01)。 2.建立顺铂致AKI模型腹腔注射顺铂后小鼠的收缩压、心率及体重进行性下降(SBP:0h105±12mmHg;24h93±10mmHg;72h:60±10mmHg; HR:0h693±86bpm;24h619±83bpm;72h395±40bpm;体重:0h23.3±1.9g;24h21.7±1.9g;72h17.2±1.0g），血肌酐和尿素氮持续升高（Scr:对照:9.4±1.37μmol/L，24h13.8±2.61μmol/L，72h:85.8±68.69μmol/L; BUN:对照:6.63±1.15mmol/L,24h9.21±1.19 mmol/L,72h68.31±25.88mmol/L)。72h处死组的小鼠肾脏损伤情况显著重于24h处死组。(ATN评分:对照:0.3±0.14,24h0.8±0.05;72h3.5±1.17)Western Blot和Real-time PCR显示顺铂注射后实验组小鼠肾组织A1AR表达水平较对照组显著上调(0.929±0.036 vs.0.717±0.079，P＜0.01);但CD73的表达水平与对照组无统计学差异。 顺铂注射后实验组小鼠A2bAR mRNA和Bax mRNA显著高于对照组(A2bAR:0.985±0.084 vs.0.787±0.088, P＜0.05; Bax:1.138±0.702 vs.8.045±7.561, P＜0.01)。但肾素的表达水平与对照组无统计学差异。 3.建立A1AR-/-小鼠顺铂致AKI模型 1)顺铂注射24h后A1AR-/-实验组小鼠血肌酐升高显著高于野生型实验组小鼠(29.2±19.86μmol/L vs.13.8±2.61μmol/L，P＜0.01)。肾脏ATN评分也显著高于野生型实验组小鼠（2.0±0.66 vs.0.75±0.05，P＜0.05）; 2)与A1AR-/-对照组相比，腹腔注射顺铂后A1AR/-实验组小鼠CD73、Bax的表达无显著变化，A2bAR的表达水平显著降低(0.693±0.118 vs.0.979±0.081， P＜0.01） 3) A1AR/-实验组小鼠肾素表达水平显著高于野生型实验组小鼠(0.070±0.042％vs.0.015±0.008％,P＜0.01)。 结论: 本研究条件下 1.肺癌化疗患者AKI发生率高，AKI发生是本组患者在院死亡的独立危险因素; 2.顺铂致AKI时介导细胞凋亡的A2bAR、Bax表达水平显著升高。 3.A1AR对顺铂所致AKI有保护作用，但与Bax介导的凋亡途径无关。
顺铂化疗;急性肾损伤;腺苷1型受体;肾素;肾小球滤过率;细胞凋亡
中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院
博士
临床医学
陈丽萌
2015
中文
R730.53;R692.02
78
2015-11-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）