P2X3受体在神经病理性疼痛中上调对JNK和P38活化的影响
目的:通过慢性背根神经节压迫(CCD)的大鼠神经病理性疼痛(NP)模型，观察P2X3受体激活后能否引起JNK和P38在DRG上表达和活化的改变，进一步探讨P2X3受体在NP中的作用机制。 方法: 1.用12只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠随机构建NP模型(CCD)组(n=6)及其假手术(SHAM)组(n=6):在手术前1d，术后第1、4、7、10、14、21、28和35d测量双侧后足的50％机械缩腿痛阈阈值(50％MPWT)。 2.检测CCD大鼠术后28d内的P2X3受体在DRG上的表达趋势:用15只SD雄性大鼠随机分成未处理大鼠(NAIVE)组(n=3)和构建CCD模型(n=12); CCD大鼠随机在术后第7d(POD07)(n=3)、术后第14d(POD14)(n=3)、术后第21d(POD21)(n=3)或术后第28d(POD28)(n=3)快速取材L4、L5 DRG，应用蛋白定量检测P2X3受体水平。 3.检测CCD大鼠和SHAM大鼠术后给予P2X3受体激动剂后引发的痛行为之一抬腿的持续时间变化:将36只SD雄性大鼠随机构建CCD组（18只）和SHAM组（18只），18只大鼠分别又随机在术后第14d给予足底注射:H2O(n=6)，β，γ-meATP100nmol(n=6)和β,γ-meATP500nmol(n=6)，体积均为50μl;检测各组给药后每分钟抬腿时间(PLTPM)。 4.检测CCD大鼠和SHAM大鼠术后JNK、pJNK（JNK磷酸化活化型）、P38和pP38（P38磷酸化活化型）在DRG上的表达变化:将9只SD雄性大鼠随机分成NAIVE组(n=3)、SHAM组(n=3)和CCD组(n=3);快速取材L4和L5 DRG，应用蛋白定量检测JNK、pJNK、P38和pP38。 5.检测CCD大鼠和SHAM大鼠术后给予P2X3受体激动剂后P2X3、JNK、pJNK、P38和pP38在DRG上的表达变化:将18只SD雄性大鼠随机构建CCD组（9只）和SHAM组（9只），9只大鼠分别又随机在术后第14d给予足底注射:H2O(n=3)，β，γ-meATP100nmol(n=3)和β，γ-meATP500nmol(n=3)，体积均为50μl;快速取材L4和L5 DRG，应用蛋白定量检测P2X3、JNK、pJNK、P38和pP38。 结果: 1.CCD模型大鼠术后第1、4、7、10、14、21、28、35d CCD组的手术侧50％MPWT比较自身手术对侧或SHAM组的手术侧后足均显著下降(P＜0.001); 2.CCD模型大鼠DRG上P2X3在POD14组与NAIVE组比较表达增强(P＜0.05); 3.在18只SHAM大鼠，给予β，γ-meATP100nmol后第1min与给予H2O比较PLTPM明显增加(P＜0.01)，在给予β,γ-meATP500nmol后第1min与给予H2O比较PLTPM显著增加(P＜0.001);在18只CCD大鼠，给予β，γ-meATP100nmol后第1min与给予H2O比较PLTPM显著增加(P＜0.001);给予β,γ-meATP500nmol后第1、2、3、5min与给予H2O比较PLTPM显著增加（P＜0.001），第6min PLTPM增加（P＜0.05）;此外，给予β,γ-meATP500nmol的CCD大鼠和给予β,γ-meATP500nmol的SHAM大鼠相比在给药后第2min PLTPM显著增加(P＜0.001)。 4.NAIVE组、SHAM组和CCD组组间比较DRG上.JNK、pJNK、P38和pP38都没有统计学意义的变化。 5.检测CCD大鼠和SHAM大鼠术后给予P2X3受体激动剂后P2X3、JNK、pJNK、P38和pP38在DRG上的表达变化:(1)P2X3:给予H2O的CCD大鼠和给予H2O的SHAM大鼠相比表达增加（P＜0.05），给予β,γ-meATP100nmol的CCD组和给予β,γ-meATP100nmol的SHAM组比较明显增加(P＜0.01);此外，给予β,γ-meATP100nmol的CCD组与给予H2O的CCD组比较增加（P＜0.05）。(2)JNK:给予β，γ-meATP100nmol的CCD组和给予β,γ-meATP100nmol的SHAM组比较明显增加(P＜0.01)，给予β,γ-meATP500nmol的CCD组和给予β,γ-meATP500nmol的SHAM组比较增加（P＜0.05）;此外在CCD大鼠，给予β,γ-meATP100nmol和给予β，γ-meATP500nmol均比较给予H2O表达增加（P＜0.05）。(3)pJNK:给予β,γ-meATP500nmol的CCD组和给予β,γ-meATP500nmol的SHAM组比较减少(P＜0.05)。(4)P38:多组间比较均无统计学意义。(5)pP38:给予β，γ-meATP100nmol的CCD组和给予β,γ-me ATP100nmol的SHAM组比较减少(P＜0.05)。 结论:在CCD模型大鼠中P2X3受体激活后发生了JNK在DRG上表达总量的增加，而磷酸化活化量的减少;P38在DRG上表达无变化，而磷酸化活化量也减少;这提示NP中P2X3受体在DRG上激活可能会引起JNK和P38通路下调。
背根神经节压迫;神经病理性疼痛;P2X3受体激活;N末端激酶;P38丝裂原活化蛋白激酶;通路下调
第二军医大学
硕士
麻醉学
熊源长
2015
中文
R441.1;R741.02
51
2015-11-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）