脊髓缝隙连接蛋白-30在大鼠吗啡耐受形成中的作用
目的:观察鞘内注射针对脊髓缝隙连接蛋白-30(CX-30)的小干扰RNA(siRNA)对正常大鼠吗啡耐受形成的影响及相关的分子机制。 方法:选取48只雄性Sprague Dawley大鼠,体重区间180-220g,随机分成4组(n=12):空白对照组(Ⅰ组)、吗啡耐受组(Ⅱ组)、错配siRNA对照组(Ⅲ组)、CX-30 siRNA处理组(Ⅳ组)。所有大鼠鞘内置管,恢复5天后鞘内注射利多卡因确定导管位置正确后记为第0天。第1天8:00-10:00,在安静的室内环境下检测四组大鼠的热刺激缩足反应潜伏期(PWTL)记为P1,随后背部皮下注射吗啡5mg/kg,30min后再次检测PWTL,并记为P2,计算吗啡30min的最大可能镇痛效应百分比%MPE。第2-8天8:30,Ⅰ、Ⅱ组鞘内注射DPEC溶剂15μl,Ⅲ组鞘内注射错配siRNA15μl,Ⅳ组鞘内注射CX-30siRNA15μl;9:00及17:00Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组背部皮下注射吗啡10mg/kg,Ⅰ组注射等量生理盐水。第9天行为学测试计算%MPE,方法同第1天。随后处死大鼠取L4-L6段脊髓采用Western blot法检测CX-30、ERK及p-ERK蛋白的表达,免疫荧光染色法检测GFAP的表达。 结果: 1.行为学测试:第1天四组大鼠P1、P2、%MPE值无显著统计学差异(P>0.05)。第9天,四组大鼠P1值无显著统计学差异(P>0.05);但其余三组与Ⅰ组比较,P2值及%MPE值明显降低(P<0.05);其中Ⅲ组与Ⅱ组比较,P2值及%MPE值无显著统计学差异(P>0.05);而Ⅳ组与Ⅱ组比较,P2值及%MPE值明显升高(P<0.05)。 2.免疫印迹:四组大鼠脊髓内总ERK表达量无显著统计学差异(P>0.05);但其余三组与Ⅰ组比较,p-ERK及CX-30表达量明显升高(P<0.05);其中Ⅲ组与Ⅱ组比较,p-ERK及CX30的表达量无显著统计学差异(P>0.05);而Ⅳ组与Ⅱ组比较,p-ERK及CX30的表达量明显降低(P<0.05)。 3.免疫荧光染色:其余三组与Ⅰ组比较,脊髓内GFAP表达较多(P<0.05);其中Ⅱ组与Ⅲ组GFAP表达最多,比较无显著统计学差异(P>0.05);而Ⅳ组与Ⅱ组比较,GFAP表达量较少(P<0.05)。 结论:鞘内注射针对脊髓CX-30的siRNA可以部分缓解正常大鼠吗啡耐受的形成,其机制可能与抑制脊髓内CX-30的表达,引起ERK磷酸化的下调,抑制星形胶质细胞的激活有关。
脊髓缝隙连接蛋白;CX-30表达;siRNA;吗啡耐受;星形胶质细胞;分子机制
第二军医大学
硕士
麻醉学
李伟彦
2015
中文
R614.41;R614.1
61
2015-11-02(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)