脊髓缝隙连接蛋白-30在大鼠吗啡耐受形成中的作用
目的：观察鞘内注射针对脊髓缝隙连接蛋白-30(CX-30)的小干扰RNA(siRNA)对正常大鼠吗啡耐受形成的影响及相关的分子机制。 方法：选取48只雄性Sprague Dawley大鼠，体重区间180-220g，随机分成4组(n=12):空白对照组（Ⅰ组）、吗啡耐受组（Ⅱ组）、错配siRNA对照组(Ⅲ组)、CX-30 siRNA处理组（Ⅳ组）。所有大鼠鞘内置管，恢复5天后鞘内注射利多卡因确定导管位置正确后记为第0天。第1天8:00-10:00，在安静的室内环境下检测四组大鼠的热刺激缩足反应潜伏期(PWTL)记为P1，随后背部皮下注射吗啡5mg/kg，30min后再次检测PWTL，并记为P2，计算吗啡30min的最大可能镇痛效应百分比％MPE。第2-8天8:30，Ⅰ、Ⅱ组鞘内注射DPEC溶剂15μl，Ⅲ组鞘内注射错配siRNA15μl，Ⅳ组鞘内注射CX-30siRNA15μl;9:00及17:00Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组背部皮下注射吗啡10mg/kg，Ⅰ组注射等量生理盐水。第9天行为学测试计算％MPE，方法同第1天。随后处死大鼠取L4-L6段脊髓采用Western blot法检测CX-30、ERK及p-ERK蛋白的表达，免疫荧光染色法检测GFAP的表达。 结果： 1.行为学测试:第1天四组大鼠P1、P2、％MPE值无显著统计学差异(P＞0.05)。第9天，四组大鼠P1值无显著统计学差异(P＞0.05);但其余三组与Ⅰ组比较，P2值及％MPE值明显降低(P＜0.05);其中Ⅲ组与Ⅱ组比较，P2值及％MPE值无显著统计学差异(P＞0.05);而Ⅳ组与Ⅱ组比较，P2值及％MPE值明显升高(P＜0.05)。 2.免疫印迹:四组大鼠脊髓内总ERK表达量无显著统计学差异(P＞0.05);但其余三组与Ⅰ组比较，p-ERK及CX-30表达量明显升高(P＜0.05);其中Ⅲ组与Ⅱ组比较，p-ERK及CX30的表达量无显著统计学差异(P＞0.05);而Ⅳ组与Ⅱ组比较，p-ERK及CX30的表达量明显降低(P＜0.05)。 3.免疫荧光染色:其余三组与Ⅰ组比较，脊髓内GFAP表达较多(P＜0.05);其中Ⅱ组与Ⅲ组GFAP表达最多，比较无显著统计学差异(P＞0.05);而Ⅳ组与Ⅱ组比较，GFAP表达量较少(P＜0.05)。 结论：鞘内注射针对脊髓CX-30的siRNA可以部分缓解正常大鼠吗啡耐受的形成，其机制可能与抑制脊髓内CX-30的表达，引起ERK磷酸化的下调，抑制星形胶质细胞的激活有关。
脊髓缝隙连接蛋白;CX-30表达;siRNA;吗啡耐受;星形胶质细胞;分子机制
第二军医大学
硕士
麻醉学
李伟彦
2015
中文
R614.41;R614.1
61
2015-11-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）