HIV-1与CD4+T细胞F-actin相互作用的实时动态成像研究
CD4+T细胞是HIVW-1病毒侵染的重要宿主细胞，其肌动蛋白F-actin在HIV-1侵染过程中起着关键作用。然而，对于F-actin在HIV-1侵染过程中作用的理解，主要来自于体外生化实验、电子显微镜成像以及免疫组化等研究结果。迄今，还未能实现HIV-1病毒侵染CD4+T细胞过程中与F-actin相互作用的实时动态成像。本研究基于对HIV-1病毒的荧光标记和CD4+T细胞F-actin的荧光标记，利用激光共聚焦荧光显微镜和超分辨SIM成像分析技术，实时、动态、超分辨可视化研究HIV-1与CD4+T细胞F-actin的相互作用。 首先，在包含HIV-1全基因组的pNL4-3质粒中插入mCherry基因，构建mCherry与MA相融合的重组质粒pNL4-3MA-mCherry，并通过转染表达、纯化富集、表征验证，获得了具有侵染活性的mCherry荧光标记的HIV-1病毒颗粒。分离获取人外周血CD4+T细胞，转染pEGFP-C1-Lifeact质粒，实现了CD4+T细胞F-actin的荧光标记。 其次，在HIV-1侵染CD4+T细胞过程中，利用激光共聚焦成像技术，在活细胞内实时动态研究F-actin的动态变化及其与HIV-1病毒相互作用过程。结果表明，HIV-1的吸附导致CD4+T细胞F-actin动力学过程发生改变，病毒加速了F-actin的解聚、聚合过程，通过这一途径，HIV-1病毒迅速与细胞发生膜融合，进入细胞。 最后，利用超分辨SIM成像技术，进一步超分辨研究了HIV-1侵染CD4+T细胞过程中F-actin的动态变化和相互作用过程。与宽场荧光显微成像相比，超分辨SIM模式成像分辨率有显著提高，通过这种方式，我们能够更加精细的分析F-actin的解聚和聚合变化过程及其与病毒的相互作用。 综上，本研究实现了HIV-1病毒与CD4+T细胞F-actin相互作用的单细胞动态实时超分辨成像，解析了病毒侵染与F-actin解聚、聚合过程的相互作用关系，对深入理解HIV-1侵染CD4+T细胞的过程与机制具有重要意义。
实时动态成像;肌动蛋白;免疫组化;艾滋病
华中农业大学
硕士
微生物学
张先恩
2015
中文
R512.91
93
2015-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）