h-FABP与h-FABP/cTnI试纸条的制备和性能指标的检测
心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)是低分子量的新型小细胞质的蛋白质，在正常情况下，血浆中浓度很低，在急性心肌梗死(AMI)发生1.5h后，血浆中H-FABP浓度急剧上升，因此可用于AMI早期诊断的标志物;同样心肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)在健康人血液内不含或含有很少量，但在心肌受损后，特别是AMI发生后，cTnⅠ能迅速地释放入血，3～6h出现异常增高，因此可用于AMI中期诊断的标志物。本课题主要是研究胶体金试纸条在即时检验(Point-of-Care Test，POCT)中的应用，将H-FABP单克隆抗体或者将H-FABP/cTnⅠ单克隆抗体包被在一个试纸条上制备胶体金免疫层析试纸条，该试纸条由胶体金作为标记物，运用双抗夹心法原理，NC膜上的T线颜色会随着待测样品中的抗原浓度升高而变深来对AMI进行定性实验，借助胶体金定量仪可以对H-FABP和cTnⅠ进行定量检测。本课题探讨了胶体金优化的制备工艺，H-FABP胶体金试纸条的制备和性能指标的检测以及H-FABP/cTnⅠ二联试纸条的制备和性能指标的检测。 第一部分 综述 综述分为3个部分:第一部分主要是介绍POCT的发展状况和应用技术;第二部分是介绍胶体金的发展、原理和制备方法，以及胶体金免疫层析技术的原理、分类、优点和应用;第三部分是H-FABP和cTnⅠ的简介和意义的介绍。 第二部分 H-FABP胶体金免疫层析试剂条处方工艺的研究 本部分探索了胶体金制备的优化工艺，对胶体金与蛋白结合的单因素进行了考察以及分析样品垫和结合垫预处理液及金标恢复液，筛选合适的制备试纸条的材料，制备出性能优良的胶体金试纸条。 第三部分 H-FABP胶体金试纸条性能指标的检测 主要对心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)胶体金免疫层析试纸条的性能指标进行了检测，结果表明层析速度为16.68mm/min，最低检测限是小于0.01μg/mL，H-FABP的浓度在0.01-1μg/mL具有良好的线性关系，准确度的相对偏差为-0.399％，精密度均小于15％，试纸条应在20℃～30℃检测，储存温度为20℃左右，待测样品用量为70μl，抗凝剂和不同样本对检测结果无干扰，临床小样本结果表明阳性和阴性的符合率达100％，H-FABP胶体金试纸条检测结果与省内三甲医院的临床检测结果一致。 第四部分 H-FABP/cTnⅠ二联试剂条的制备和性能指标检测 本部分是H-FABP/cTnⅠ二联胶体金试纸条的制备和性能指标检测，先分别将H-FABP和cTnⅠ的单克隆抗体1与胶体金结合，再喷涂在经预处理的结合垫上，37℃烘干待用;cTnⅠ和H-FABP的单克隆抗体2分别包被在T1线和T2线，37℃烘干待用，最后按第二章一样组装试纸条，实验结果表明这两种蛋白之间没有交叉反应。同样对该二联试纸条的性能进行了检测，实验结果表明层析速度为16.431 mm/min，H-FABP和cTnⅠ的最低检测限分别小于10ng/mL和0.3ng/mL，H-FABP的浓度在10-1000ng/mL和cTnⅠ的浓度在3.3-54ng/mL具有良好的线性关系，准确度和精密度均符合要求，试纸条的检测温度、储存温度和待测样品用量与第三章结果一样，抗凝剂和不同样本对检测结果无干扰，临床小样本结果表明阳性和阴性的符合率达100％，H-FABP/cTnⅠ二联胶体金试纸条检测结果与省内三甲医院的临床检测结果一致。
胶体金免疫层析试纸条;制备工艺;心型脂肪酸结合蛋白;心肌钙蛋白Ⅰ;性能指标
江苏大学
硕士
药剂学
余江南
2015
中文
TQ421.7
104
2015-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）