黑蚂蚁纤溶活性蛋白的分离纯化及其性质研究
蚂蚁种类繁多，数量庞大，分布广泛，资源丰富，是世界最庞大和最兴旺的昆虫之一，而且历史悠久，据统计已存在地球长达1亿年。其具有生命力强，寿命长、营养丰富等特点。其中蛋白质含量极高，且含有多种人体所必需的氨基酸、微量元素和矿物质。因此，蚂蚁不仅具有较高的食用和营养价值，而且具有极为独特的保健和药用价值，越来越受到人们的青睐。随着社会和经济的不断发展，蚂蚁的食用价值和药用价值也不断的被开发，应用前景十分广阔。 本文首次从干黑蚂蚁体内分离纯化得到1种纤溶活性蛋白，并对此蛋白的一些性质进行了初步的研究。采用硫酸铵逐级盐析法对其蛋白质进行提取分离，并利用DEAE-52纤维素离子交换层析和Sephacryl S-100葡聚糖凝胶过滤层析柱对分离所得的黑蚂蚁的蛋白粗提液进行纯化，经SDS凝胶电泳检测，得到相对分子质量约为25kD的多肽单链。经纤溶活性平板法检测，该蛋白硫酸铵盐析最佳饱和度浓度为30％～90％，具有较强纤溶活性，其酶活力为101.1735U/ml，经检测，每克黑蚂蚁纤溶活性相当于67.4552尿激酶国际标准活力单位，Braford法测定蛋白浓度，经计算可知其蛋白浓度为2.8041mg/ml，蒽酮硫酸法测定其含糖量，可测得糖含量为8.1714％，表明了该蛋白可能是一种糖蛋白。 本实验研究了不同温度、pH值对黑蚂蚁纤溶活性蛋白酶活性的影响。结果表明，该酶最适反应温度为45℃，说明该蛋白耐热性较差，pH在3.0该蛋白酶活力最高，而pH在4.0～8.0范围内，该酶活力基本保持稳定; 此外，本实验还研究了一系列的物化因子对目的蛋白酶活性的影响。实验证明:(1)Na+、K+、Mg2+、Zn2+、Ba2+、Mn2+、Ca2+对该酶均有不同程度的影响，其中，Na+、K+对其酶活性影响较小，Mg2+对该酶纤溶活性有强烈的激活作用，而Zn2+、Ba2+、Mn2+、Ca2+等对此酶活力有明显的抑制作用;(2)不同抑制剂、表面活性剂与变性剂对黑蚂蚁纤溶活性蛋白活性的影响不同，其中红霉素几乎对其纤溶活性没影响;肝素钠对其活力的影响较小;青霉素对其酶活性有较弱的促进作用;而PMSF对其酶活性具有较强的抑制作用;而用β-巯基乙醇、吐温-20、DFP、SDS则对该此酶活力有强抑制作用;(3)超声破、紫外线对黑蚂蚁纤溶活性蛋白活性的影响不同，其中，在超声波作用下，随着超声波的频率的增大和处理时间的延长，黑蚂蚁纤溶活性蛋白的酶活力明显的下降。功率相同时，时间越长，酶活性受到抑制越大，活性下降越明显;时间相同时，功率越大，超声波对目的蛋白的作用越强，酶活性抑制效果越明显，下降越明显;在紫外线的照射下，随着时间的不断增长，紫外线对目的蛋白的影响越大，酶活性下降越明显，下降幅度越大。
黑蚂蚁;纤溶活性蛋白;分离纯化;药用价值
广东工业大学
硕士
生物化工
谭竹钧
2014
中文
R284.2
73
2015-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）