Il-17F对大鼠成骨细胞BMp-2及Noggin mRNA表达的影响
目的：骨细胞和免疫细胞共同起源于骨髓细胞，它们在功能上也有一定的相连，并且受一些相同细胞因子的影响。最近有研究显示IL-17因子家族中的一个重要成员IL-17F在体内具有促进成骨细胞的作用，但是相关研究甚少。本研究通过提取并培养大鼠原代成骨细胞，以不同浓度的IL-17F刺激成骨细胞，观察IL-17F对成骨细胞的增殖能力、骨形态发生蛋白2(Bone Morphogenetic Protein2，BMP-2)及BMP-2抑制因子Noggin mRNA表达的影响。 方法： 1.大鼠原代成骨细胞的提取、培养及鉴定 新生24h内的Wistar大鼠8只，脱颈处死后，于无菌操作下取出颅骨，完全去除骨膜、血管及结缔组织，反复冲洗骨片至透亮，将骨片剪碎后，运用胰酶-胶原酶消化法及组织块法提取原代成骨细胞。 将提取的原代成骨细胞加适量培养液于培养箱内进行培养，并在传代时运用差速贴壁法对成骨细胞进行纯化，取纯化后的第4代成骨细胞进行实验。 采用形态学观察及碱性磷酸酶(ALP)染色法对成骨细胞进行鉴定。 2.实验分组及IL-17F刺激 将纯化后的第4代大鼠成骨细胞随机分为正常对照组和实验组。对照组使用正常培养液进行培养;实验组分别用正常培养液配制的含有不同浓度（1ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml）IL-17F的培养液进行培养，共5个实验组，分别于干预第1、3、5天后进行指标检测。 3.指标检测 (1)采用MTT法检测成骨细胞增殖活性。 (2)采用RT-PCR检测成骨细胞BMP-2及Noggin mRNA的表达。 结果： 1.大鼠原代成骨细胞培养与鉴定: 培养的原代成骨细胞贴壁生长稳定，细胞形态和生长状况均符合成骨细胞的特征。ALP染色结果显示，大量阳性细胞胞核及胞质内可见ALP染色成的灰黑色颗粒或块状深染沉淀，鉴定为成骨细胞。 2.IL-17F对成骨细胞增殖的影响 MTT结果显示，与对照组相比，第1天时只有100ng/ml实验组细胞增殖率明显升高(P＜0.05），10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml实验组虽然也有升高但无统计学意义(P＞0.05);第3天与第5天时，10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml实验组细胞增殖率均显著升高（P＜0.05）;1ng/ml实验组细胞增殖率在三个时间点变化均不明显(P＞0.05)。 3.IL-17F对成骨细胞BMP-2及Noggin mRNA表达的影响 RT-PCR结果显示，与对照组相比，20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml实验组BMP-2 mRNA表达水平从第1天开始就明显升高(P＜0.05)，而10ng/ml实验组BMP-2 mRNA表达水平第3天开始才显著升高(P＜0.05)，1ng/ml实验组BMP-2 mRNA表达水平则在三个时间点均无明显变化(P＞0.05)。与对照组相比，10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml实验组Noggin mRNA表达水平均从第1天开始就显著降低（P＜0.05），1ng/ml实验组Noggin mRNA表达水平则始终无明显变化(P＞0.05)。 结论： 一定浓度的IL-17F可以促进体外培养的大鼠成骨细胞增殖，提高大鼠成骨细胞BMP-2 mRNA表达，降低Noggin mRNA表达，并且呈一定的剂量-时间依赖性。
成骨细胞;骨形态发生蛋白2;抑制因子;基因表达;白细胞介素-17F
山东大学
硕士
麻醉学
于灵芝
2015
中文
R336
47
2015-09-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）