四环素免疫层析试纸条检测方法的研究
本研究建立了四环素胶体金免疫层析检测方法，并应用于动物源性食品中四环素的快速检测。 利用甲醛法将四环素与阳离子化的牛血清白蛋白(cBSA)偶联制备包被抗原(TC-cBSA)。采用Protein A—— Sepharose4B免疫亲和层析法纯化四环素特异性抗血清获得四环素多克隆抗体。采用柠檬酸三钠还原法制备粒径为20 nm的胶体金，优化得到制备金标抗体的最适pH为8.0，最适抗体量为24μL。 通过各种条件的优化，将包被抗原(TC-cBSA)1∶1稀释、羊抗兔二抗1∶100稀释，分别固定在硝酸纤维素薄膜上作为检测线和质控线，将金标抗体1∶3稀释喷涂到0.05％SDS-L处理的金标挚上，经过组装制成四环素胶体金免疫层析试纸条。四环素免疫层析试纸条的检出限:在标准品溶液中的视觉检出限均为40μg/L，检测时间为5 min。 对牛奶进行离心稀释处理，蜂蜜稀释处理，猪肉、牛肉、鸡肉、鱿鱼、大眼鲷鱼、比目鱼、虾、三文鱼和鲈鱼用3％的三氯乙酸处理，直接用试纸条进行检测。其中牛奶的视觉检出限为40μg/L，其余10种样品的视觉检出限为80μg/kg，均低于最高残留限量(MRLs)。所建立的四环素免疫层析分析方法与酶联免疫分析方法的一致性较好，说明方法有较好的准确性。 四环素免疫层析试纸条在室温密封干燥的条件下保存，至少3个月检测结果不受影响。特异性较好，操作方便、快速，结果稳定、可靠，可作为四环素残留的现场监控筛检手段。 本论文还对氧化石墨烯-胶体金免疫层析试纸条进行了初步探索，采用柠檬酸三钠还原法合成了氧化石墨烯-胶体金，优化得到标记抗体的最适pH为8.0，最适抗体量为24μL。此试纸条视觉检出限为20μg/L，较传统胶体金试纸条有所进步，为今后深入研究奠定了基础。
四环素;免疫层析试纸条;检测方法;动物源性食品
天津科技大学
硕士
营养与食品卫生学
方国臻
2014
中文
S859.84
66
2015-07-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）