雷帕霉素对大鼠肝脏冷缺血再灌注肺损伤的影响
目的:探讨雷帕霉素对大鼠肝脏冷缺血再灌注肺损伤的影响及相关机制。 方法:健康雄性SD大鼠24只，8～10周龄，体重220～250 g，采用随机数字表法，将其随机分为3组:假手术组（S组）大鼠仅接受麻醉后开腹，游离肝叶及相关血管后关腹;模型对照组（C组）大鼠采用肝脏冷缺血再灌注模型，分别采用门静脉插管和肝下下腔静脉缺口作为灌注道和流出道，于肠系膜上静脉上方和右肾静脉上方阻断门静脉及肝下下腔静脉，同时阻断肝上下腔静脉，用4℃乳酸林格氏液经门静脉插管灌注肝脏，用吸引器及时吸净肝下下腔静脉缺口流出的血和灌注液，灌注过程中将包有纱布的冰块置于肝脏表面维持低温,20 min后随即恢复肝脏血液灌注，冲洗腹腔后关腹;雷帕霉素组（R组）大鼠术前2w连续给予1 mg/kg/d雷帕霉素灌胃，手术操作同C组。于再灌注12 h时抽取下腔静脉血样，采用酶联免疫吸附分析(ELISA)测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6（IL-6）浓度。切取肺，取部分肺制成肺组织匀浆，测定肺组织内丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。一部分肺组织分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路蛋白的表达水平。另取部分肺组织用10％甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，切成4μm薄片，行苏木素-伊红(HE)染色后于光学显微镜下观察肺组织病理学结果。数据应用SPSS17.0统计软件进行分析处理，计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。 结果:与S组相比，C、R组血清中TNF-α、IL-6的浓度均升高(P＜0.05)，肺组织匀浆MDA、NO的含量升高及iNOS mRNA的表达上调，mTOR蛋白量表达增多，SOD活性降低（P＜0.05）;与C组相比，R组血清中TNF-α、IL-6的浓度均降低(P＜0.05)，肺组织匀浆MDA、NO的含量降低及iNOS mRNA的表达下调，mTOR蛋白量表达减少，SOD活性升高(P＜0.05)。光镜下S组肺组织形态结构未见明显病理学改变，C组可见大量的炎性细胞浸润，肺泡大小不一，肺泡间隔增宽，大量红细胞渗出，毛细血管充血;R组损伤较轻，仅见少量炎性细胞浸润，部分肺泡间隔增宽。 结论:1.大鼠肝脏冷缺血再灌注损伤能激活mTOR信号通路，恢复血流灌注后损伤明显，氧化应激、炎症反应及mTOR信号通路的激活在肝脏冷缺血再灌注肺损伤的发生过程中起着重要作用。 2.预先给予雷帕霉素能抑制mTOR信号通路的异常激活，影响其相关基因和蛋白的表达，降低iNOS mRNA的稳定性，进而减少细胞内NO的生成，减轻缺血再灌注损伤。
雷帕霉素;氧化应激;炎症反应;肝脏冷缺血;再灌注肺损伤;动物模型;保护作用
天津医科大学
硕士
临床医学;麻醉学
杜洪印
2014
中文
R614
57
2015-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）