狂犬病病毒结构基因的克隆及犬瘟热病毒N蛋白基因与eGFP基因重组质粒的构建
本研究从BHK-21细胞培养的狂犬病病毒SRV9株病毒液中提取病毒总RNA，通过反转录PCR(Reverse transcript PCR，RT-PCR)技术进行狂犬病病毒结构基因的扩增，得到1352 bp的N基因（核蛋白基因，nucleoprotein gene，N），893 bp的P基因（磷酸化蛋白基因，phosphoprotein gene，P），608bp的M基因（基质基因，matrix protein gene，M），1574bp的G基因（糖蛋白基因，glycoprotein gene，G），3372 bp的L1基因（大转录蛋白1，large protein gene1，L1）以及3012bpL2基因（大转录蛋白2，large protein gene2，L2），并将其分别连接于pMD19-T载体，进行测序并与SAD B19株比对，实验结果如下:N基因、P基因、M基因、G基因、L1基因以及L2基因的核苷酸序列与SAD B19株的核苷酸同源性分别为100％、99.66％、99.67％、99.04％、100％及98.70％，氨基酸序列的同源性分别为100％、98.99％、100％、98.65％、100％以及99.91％。 应用重组PCR技术进行基因片段的拼接，构建增强型绿色荧光蛋白eGFP基因与犬瘟热病毒N蛋白基因的重组质粒(pT-eGFP-CDV N)、狂犬病病毒融合基因P-M的重组质粒(pT-PM)以及融合基因L1-L2的重组质粒(pT-L)。实验结果如下:通过重组PCR技术获得的融合基因eGFP-CDV N、P-M和L的片段分别为2292bp、1501 bp和6384bp，重叠区域完全重合，未发生突变及错位。 本研究成功构建融合基因片段，为狂犬病病毒SRV9株全长cDNA的构建以及RV减毒重组基因疫苗的研究探索条件。
狂犬病病毒SRV9;结构基因;犬瘟热N蛋白基因;eGFP基因;重组PCR技术
新疆农业大学
硕士
基础兽医学
简子健
2014
中文
S855.3
64
2015-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）