TLR4信号通路介导的云芝糖肽免疫调节机制的研究
目的:研究云芝糖肽(PSP)对小鼠腹腔巨噬细胞及荷瘤小鼠脾脏TLR4信号通路的调控作用，从体外和体内探讨PSP免疫调节的信号转导机制。 方法: 1.体外分离C57BL/10J（正常对照）小鼠和C57BL/10ScCr(TLR4基因缺陷)小鼠的腹腔巨噬细胞，各分为3组，即正常对照组、PSP组(25μg/ml)和阳性对照LPS组(100 ng/ml)，采用ELISA检测腹腔巨噬细胞培养上清中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量，Western blot检测各组巨噬细胞中TLR4信号通路相关节点蛋白及磷酸化蛋白的表达水平。 2.采用C57BL/10J（正常对照）小鼠和C57BL/10ScCr（TLR4基因缺陷）小鼠建立EAC实体型荷瘤小鼠模型，各分为4组:生理盐水对照组、阿霉素化疗组、PSP组和LPS组，给药25天后，颈椎脱臼法处死小鼠，取小鼠实体瘤、胸腺和脾等组织，称量后计算抑瘤率和脏器指数。应用定量PCR(Q-PCR)检测各组小鼠脾脏中TLR4信号通路相关节点基因表达水平，采用Western blot检测信号通路相关节点蛋白表达情况。 结果: 1.体外实验ELISA结果显示，正常对照B10(TLR4+/+)小鼠LPS组和PSP组巨噬细胞上清中TNF-α和IL-6的含量较对照组明显升高(P＜0.05)，而TLR4基因缺陷ScCr(TLR4-/-)小鼠三组细胞上清中TNF-α和IL-6的含量无明显差异(P＞0.05)。Western blot结果显示，PSP和LPS显著上调B10(TLR4+/+)小鼠巨噬细胞中TLR4及其下游信号分子TRAF6蛋白表达水平以及NF-κB p65和AP-1蛋白的磷酸化水平，差异均有统计学意义(P＜0.05)，而对ScCr(TLR4-/-)小鼠巨噬细胞无明显作用(P＞0.05)。 2.体内实验抑瘤率及脏器指数结果显示，在正常对照B10(TLR4+/+)荷瘤小鼠中，ADM治疗组和PSP治疗组对EAC实体瘤均有抑制作用(P＜0.05)，抑瘤率分别为40.68％和25.20％;相比，ADM治疗组小鼠胸腺对照组明显萎缩(P＜0.05)，脾脏指数较NS组有下降但无显著差异(P＞0.05)。PSP治疗组可以显著缓解ADM导致的胸腺及脾脏的萎缩(P＜0.05)。在TLR4基因缺陷ScCr(TLR4-/-)荷瘤小鼠中，ADM组对实体瘤有明显抑制作用(P＜0.05)，抑瘤率为38.21％，而PSP治疗组对实体瘤虽有一定的影响，但与NS对照组间无显著差异(P＞0.05); PSP和ADM处理组小鼠胸腺及脾脏指数虽有一定变化，但是差别无统计学意义(P＞0.05)。Q-PCR和Western blot结果显示，PSP和阳性对照LPS均可以上调B10(TLR4+/+)荷瘤小鼠脾脏TLR4信号通路中TLR4、TRAF6、NF-κB和AP-1基因和蛋白的表达量(P＜0.05)，而在ScCr(TLR4-/-)荷瘤小鼠中，PSP和LPS对脾脏TLR4信号通路中TLR4、TRAF6、NF-κB和AP-1基因和蛋白的表达有一定的影响，经统计差异无显著性(P＞0.05)。 结论:体内和体外实验结果表明PSP可能通过TLR4信号通路发挥其免疫调节作用。
云芝糖肽;TLR4信号通路;免疫调节;转导机制;动物实验;基因表达
重庆医科大学
硕士
临床检验诊断学
鲍依稀
2014
中文
R285.5
49
2015-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）