小剂量氯胺酮复合异丙酚对抑郁大鼠电休克疗效及海马GlrR1/GABAAR表达和功能的影响
目的：通过评估小剂量氯胺酮复合异丙酚联合电休克疗法(electroconvulsive shock，ECS)后抑郁大鼠抑郁样行为、认知功能和海马AMPA GluR1、GABAAR表达及磷酸化水平的变化，探讨小剂量氯胺酮复合异丙酚改善抑郁大鼠电休克疗效的分子机制。 方法：SPF级成年雄性SD大鼠50只，鼠龄12周，体重200～250g，应用慢性不可预见性轻度应激法(Chronic unpredictable mild stress，CUMS)建立抑郁模型。根据随机数字表，将其分为5组(n=10):抑郁组（D组）、ECS组（E组）、氯胺酮+ECS组（KE组）、异丙酚+ECS组（PE组）和氯胺酮+异丙酚+ECS组(KPE组)。ECS组腹腔注射生理盐水8ml/kg后实施ECS(电流50mA、频率50Hz、正弦波、脉冲宽度0.7ms、持续1s)，以引起强直-阵挛抽搐发作为处理成功;KE组、PE组分别腹腔注射氯胺酮10mg/kg，异丙酚80mg/kg，KPE组腹腔注射氯胺酮10mg/kg与异丙酚80mg/kg，待大鼠翻正反射消失后行ECS，参数设置同E组，ECS为每日1次，持续7天。分别于建模前、建模后、电休克处理结束后选取糖水偏好实验(Sucrose preference test，SPT)、旷场实验(Open-field test，OFT)评估大鼠抑郁情况;于建模后、电休克处理结束后选取Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力。待行为学实验完成后处死大鼠，采用免疫组织化学法检测大鼠海马CA1、CA3区AMPA GluR1与GABAAR的表达，采用Western-blot法检测大鼠海马GluR1 Ser845与GABAARγ2 Ser327的磷酸化水平。 结果：(1)糖水偏好实验:与建模前相比，建模后大鼠SPP降低（P＜0.05）;建模后，各组大鼠SPP差异无统计学意义(P＞0.05);处理后，与D组相比，余4组SPP增加(P＜0.05);与E、KE、PE组分别比较，KPE组SPP增加(P＜0.05)，但三组间SPP差异无统计学意义（P＞0.05）。 (2)旷场实验:与建模前相比，建模后大鼠水平活动距离和直立次数均减少（P＜0.05）;建模后，各组水平活动距离和直立次数差异无统计学意义(P＞0.05);处理后，与D组相比，余4组水平活动距离和直立次数增加(P＜0.05);与E、KE、PE组分别比较，KPE组水平活动距离和直立次数增加（P＜0.05），但三组间水平活动距离和直立次数差异均无统计学意义（P＞0.05）。 (3)Morris水迷宫实验:建模后，各组大鼠逃避潜伏期、空间探索时间差异无统计学意义（P＞0.05）;处理后，与D组相比，E组逃避潜伏期延长，空间探索时间缩短(P＜0.05)，KPE组逃避潜伏期缩短，空间探索时间延长;与E组相比，KE、PE和KPE组逃避潜伏期缩短、空间探索时间延长(P＜0.05);与KE、PE组相比，KPE组逃避潜伏期缩短、空间探索时间延长（P＜0.05）。 (4)海马AMPA GluR1与GABAAR表达:与D组相比，其余4组GluR1表达均增加，E、PE和KPE组GABAAR表达降低(P＜0.05)，KE组GABAAR表达差异无统计学意义（P＞0.05）;与E组相比，KE组GluR1和GABAAR表达增加，PE组GABAAR表达降低，KPE组GluR1和GABAAR表达增加(P＜0.05);与PE组相比，KPE组GluR1和GABAAR表达增加(P＜0.05)。 (5)海马AMPA GluR1/GABAAR比值:与D组相比，余4组GluR1/GABAAR比值均上调(P＜0.05);与E、KE和PE组相比，KPE组GluR1/GABAAR比值上调(P＜0.05)，但E组、KE组和PE组三组间GluR1/GABAAR比值差异无统计学意义(P＞0.05)。 (6)海马p-GluR1 Ser845与p-GABAARγ2 Ser327水平:与D组相比，余4组p-GluR1 Ser845均增加，KE组p-GABAARγ2 Ser327降低，E、PE和KPE组p-GABAARγ2 Ser327增加(P＜0.05);与E组相比，KE、PE和KPE组p-GluR1 Ser845增加，KE组p-GABAARγ2Ser327降低PE和KPE组p-GABAARγ2 Ser327增加(P＜0.05);与KE组相比，PE组p-GluR1 Ser845降低，p-GABAARγ2 Ser327增加，KPE组p-GluR1 Ser845与p-GluR1 Ser845均增加(P＜0.05);与PE组相比，KPE组p-GluR1 Ser845增加，p-GABAARγ2 Ser327降低（P＜0.05）。 (7)海马p-GluR1 Ser845/p-GABAARγ2 Ser327比值:与D组相比，余4组p-GluR1 Ser845/p-GABAARγ2 Ser327均上调（P＜0.05）;与E组相比，KE、KPE组p-GluR1 Ser845/p-GABAARγ2 Ser327上调(P＜0.05)，PE组p-GluR1 Ser845/p-GABAARγ2 Ser327差异无统计学意义（P＞0.05）;与KE组相比，PE、KPE组p-GluR1 Ser845/p-GABAAR2Ser327下调(P＜0.05);与PE组相比，KPE组p-GluR1 Ser845/p-GABAARγ2 Ser327上调（P＜0.05）。 (8)各组大鼠海马蛋白表达水平指标与行为学指标相关分析:大鼠海马CA1、CA3区GluR1及GluR1/GABAAR与SPP、水平活动距离及直立次数有相关性;GluR1与学习成绩有相关性，GABAAR与记忆成绩有相关性。 (9)各组大鼠海马蛋白磷酸化水平指标与行为学指标相关分析:海马p-GluR1及p-GluR1/p-GABAAR与SPP、水平活动距离及直立次数有相关性;p-GluR1、p-GABAAR及p-GluR1/p-GABAAR只与学习成绩有相关性。 结论：小剂量氯胺酮复合异丙酚可增强电休克对抑郁大鼠的抗抑郁疗效，且可进一步减轻电休克所致的认知功能损害，其机制与其上调抑郁大鼠海马GluR1/GABAAR比值，同时维持p-GluR1 Ser845/p-GABAARγ2 Ser327比值平衡有关。
抑郁症;氯胺酮;二异丙酚;电惊厥疗法;AMPA受体;GABA-A受体
重庆医科大学
硕士
麻醉学
闵苏
2014
中文
R614
66
2015-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）