新型纳米羟基磷灰石—脱氧核酶递送系统的应用研究
脱氧核酶是利用体外分子进化技术获得的一种具有催化功能的短片段单链DNA，具有高效的催化活性和结构识别能力。制约其生物医学应用的瓶颈是缺乏有效的递送系统。纳米羟基磷灰石(HAP)是一种新型的无机纳米材料，作为最理想的非病毒载体之一，具有广泛的应用前景。 目的:构建高效的HAP/脱氧核酶纳米递送系统;阐明HAP/脱氧核酶纳米递送系统细胞跨膜转运机理及其生物有效性和生物安全性;完善脱氧核酶技术平台，克服脱氧核酶临床应用的关键瓶颈，建立以纳米材料为代表的新型递送系统，实现该核酸类药物的临床转化。 方法:本研究中，我们首次建立了有效的精氨酸修饰的羟基磷灰石(Arg-nHAP)纳米包装和递送系统，采用瞬时转染技术、荧光显微镜技术、激光共聚焦荧光显微镜技术和Western blot技术等检测Arg-nHAP/DZ1纳米递送系统在细胞内的转染效率，研究递送系统的跨膜机制及其在细胞内的分布，在蛋白水平检测脱氧核酶的生物学活性。 结果:Arg-nHAP对脱氧核酶的体外包装效率可高达100％。经过不同抑制剂处理证实了Arg-nHAP/DZ1复合物是通过能量依赖的内吞作用进入细胞。此外，我们利用激光共聚焦显微技术，观察到Arg-nHAP可将靶向LMP1脱氧核酶有效地递送到鼻咽癌细胞内，并进入细胞核，发挥其生物学作用，下调靶基因LMP1的表达。在鼻咽癌裸鼠移植瘤模型中，Arg-nHAP将脱氧核酶有效地递递到肿瘤组织内，下调EBV-LMP1的表达和抑制肿瘤生长。 结论:本研究证实了Arg-nHAP是一种有效的脱氧核酶的转染载体，为核酸类药物的靶向治疗提供了一种新型的高效安全载体。
纳米羟基磷灰石;脱氧核酶;递送系统;鼻咽癌;核酸类药物;靶向治疗
中南大学
硕士
基础医学
孙仑泉;杨力芳
2014
中文
R730.5;R739.63
81
2015-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）