miRNA-200b及其靶基因IGF-2R在卵巢浆液性肿瘤中的表达研究
卵巢浆液性肿瘤(ovarian serous tumors)是最常见的妇科肿瘤之一，占卵巢上皮-间质肿瘤的46％，其良性肿瘤，交界性肿瘤及恶性肿瘤的比例大约为60％，10％和30％。近年来，尽管临床上恶性浆液性卵巢癌的综合治疗已经很普遍，但以手术为主，化疗为辅的综合治疗对卵巢癌的生存率并没有显著提高。miRNA表达研究过程中，基因芯片技术可以有效快捷地比较大量miRNAs表达变化情况。在芯片检测结果后，利用实时荧光定量PCR方法是验证miRNA芯片数据或检测单个miRNA表达的高灵敏度的方法。胰岛素样生长因子受体IGF-2R是miRNA-200家族Target Scan软件预测的常见靶基因，IGF-2R信号通路参与调节上皮间质转化(EMT)，目前尚未有研究证实IGF-2R是miRNA-200家族的靶基因，IGF-2R与miRNA-200家族在卵巢浆液性腺癌中发生、发展的相关分子机制仍然需要深入研究。 目的:用小RNA高通量测序技术筛选卵巢浆液性乳头状囊腺癌组织中差异表达的microRNAs，实时荧光定量PCR验证其表达量，探讨差异表达microRNAs在浆液性乳头状囊腺癌中的作用机制;在蛋白水平检测miRNA-200家族中的miRNA-200b预测靶基因IGF-2R在卵巢浆液性乳头状囊腺癌，交界型浆液性囊腺瘤、浆液性囊腺瘤及正常卵巢的表达，探讨它们的相关性及与临床病理特征间的关系，为发掘miRNA-200家族作为新一代的恶性浆液性卵巢癌早期诊断的肿瘤分子标志物的可行性提供理论基础。 方法:(1)取3例恶性卵巢肿瘤（术中快速及术后病理检测结果均证实为卵巢浆液性乳头状囊腺癌）做为肿瘤组，手术切除3例正常卵巢组织（来源于子宫肌瘤子宫+双附件切除标本）做为对照组，采用小RNA高通量测序平台及相关软件获取扫描图像和对原始数据进行分析运算，选取在恶性浆液性卵巢肿瘤中表达较其它miRNA高的miRNA200家族，且与正常卵巢组织中的表达相比在浆液性卵巢腺癌中明显过度表达的has-miR-200b-3p为进一步研究对象;(2)通过实时荧光定量PCR技术验证芯片结果;(3)采用免疫组织化学方法检测has-miR-200b-3p靶蛋白胰岛素生长因子2受体(IGF-2R)在86例卵巢浆液性乳头状囊腺癌，卵巢交界型浆液性囊腺瘤、卵巢浆液性囊腺瘤及正常卵巢的表达，结合患者的临床资料统计分析相关指标之间的关系。 结果:(1)所提取的RNA经过质量检测符合芯片实验需求;(2)恶性浆液性卵巢肿瘤组和对照组芯片研究结果发现107个miRNA差异表达（其中84个表达显著上调，23个表达显著下调）;(3)选取浆液性卵巢癌标本中表达显著上调的has-miR-200b-3p进行定量研究，其结果符合芯片分析结果;(4)免疫组化SP法检测IGF-2R蛋白在正常卵巢组织、浆液性囊腺瘤、交界型浆液性囊腺瘤、浆液性乳头状囊腺癌中阳性表达率依次减弱，分别为100％、93.3％、86.7％和47.8％。卵巢浆液性乳头状囊腺癌组织与卵巢交界型浆液性囊腺瘤，卵巢浆液性囊腺瘤及正常卵巢组织IGF-2R蛋白阳性表达率比较，均存在显著统计学差异(双侧P=0.008;P=0.002，P=0.003)，正常卵巢组织和卵巢浆液性囊腺瘤比较没有明显统计学差异（双侧P=0.405，P＞0.05）;IGF2R表达的阳性表达程度与患者的年龄、病理学分级无显著差异(P＞0.05)，与不同的临床分期、腹腔有无淋巴结转移和生存状态有显著差异(P均＜0.05）。 结论:卵巢浆液性乳头状囊腺癌中存在差异表达的miRNA，这些差异表达的miRNA有可能作为上皮性卵巢癌新的诊断标记和治疗的新靶点。
卵巢浆液性肿瘤;发病机理;胰岛素样生长因子受体;miRNA-200b;上皮间质转化
中南大学
硕士
基础医学
粟占三;邹琼
2014
中文
R737.31
50
2015-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）