miR-1246在EGFL7介导的BGC823侵袭迁移中的作用及其机制研究
背景与目的:侵袭转移是导致胃癌患者死亡的主要原因，有关其分子机制的研究一直以来是胃癌研究领域的热点。EGFL7是一种分泌型促血管生成因子，在许多肿瘤中都可发现其高表达。本课题组前期研究发现降低胃癌细胞BGC823中的EGFL7基因表达后，细胞的侵袭迁移能力下降，并伴有miR-1246的表达上调，但具体效应机制不清。miR-1246是一新发现的miRNA，目前有关它的研究较少，关于它在胃癌中作用的研究尚未见报道。本研究旨在探讨miR-1246对胃癌细胞生物学行为的影响，并通过靶基因预测网站预测、双荧光素酶报告基因实验验证等方法，探讨、验证miR-1246的效应分子，以此来说明EGFL7基因低表达后BGC823细胞侵袭迁移能力的下降可能与miR-1246及其预测靶基因有关，为研究miR-1246在胃癌中的作用提供了新思路，也为研究EGFL7在胃癌中作用机制及其后续的分子靶向治疗提供新视角。 方法:(1)用Real-time PCR验证BGC823、BGC823-NC（阴性对照组BGC823稳定细胞系）、BGC823-E(EGFL7低表达的BGC823稳定细胞系)三组细胞中miR-1246表达情况; (2) Western blotting和Real-time PCR检测BGC823、BGC823-NC、BGC823-E三组细胞中N-cadherin表达情况; (3)转染miR-1246 mimics后胃癌细胞BGC823的侵袭迁移能力变化及其预测靶基因N-cadherin的蛋白和mRNA表达情况; (4)转染miR-1246 inhibitor后胃癌细胞BGC823-E的侵袭迁移能力变化及其预测靶基因N-cadherin的蛋白和mRNA表达情况; (5)将含有与miRNA-1246结合位点的N-cadherin3'-UTR（野生型）及突变位点（突变型）构建至双荧光素酶报告质粒中，与miR-1246mimics及Negative Control共转染至293T细胞中，检测双荧光素酶活性。 结果:(1)三株细胞中BGC823-E中的miR-1246表达上调; (2)三株细胞中BGC823-E的N-cadherin蛋白表达减弱，而其mRNA变化不明显; (3)转染miR-1246 mimics后胃癌细胞BGC823的侵袭迁移能力减弱，同时N-cadherin蛋白表达明显减弱，mRNA变化不明显; (4)转染miR-1246 inhibitor后胃癌细胞BGC823-E的侵袭迁移能力增强，同时N-cadherin的蛋白表达增加，mRNA变化不明显; (5)与其他组比较，共转染mimics与野生型质粒组的相对荧光素酶活性明显下降，表明miR-1246能够与N-cadherin的3'-UTR结合。 结论:(1) miR-1246能够抑制胃癌细胞BGC823的侵袭迁移，其机制可能与下调靶基因N-cadherin蛋白的表达有关; (2) miR-1246可直接靶向调节N-cadherin的表达，其机制与抑制其mRNA翻译有关; (3) EGFL7下调引起BGC823细胞侵袭迁移能力的下降，可能与miR-1246的靶基因N-cadherin蛋白表达降低有关。
胃癌;miR-1246;EGFL7基因;侵袭迁移;生物学行为
中南大学
硕士
基础医学
刘保安;王宽松
2014
中文
R735.2
75
2015-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）