miR-205对卵巢癌细胞生物学行为的影响
背景:卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，在全球女性妇科肿瘤中死亡率位列第二位。由于卵巢癌早期症状不明显，又尚未有有效的肿瘤标记物来进行预警和早期诊断，在进展期卵巢癌患者即使接受治疗，绝大部分五年生存率仍低于20％。 近年来，关于微小RNA(microRNA，miRNA)调控基因表达的研究成为肿瘤研究的新热点。微小RNA是长约19～25nt的单链非编码小分子RNA，它广泛存在于植物，非脊椎动物和脊椎动物中。miRNA在调节细胞分化，细胞周期，细胞凋亡中均发挥着重要作用。目前有超过900种miRNA在人体中被发现。miR-205定位于lq32.2，是一段-uccuucauuccaccggagucug-编码的microRNA，在不同种系中呈现高度保守性。miR-205作为肿瘤致癌基因或抑制基因取决于特定肿瘤环境中的靶基因表达。现已有研究证实在不同的癌细胞株中miR-205发挥着促进肿瘤或抑制发生发展的作用。 本课题组前期应用比较蛋白质组学研究发现有两种差异蛋白Ezrin和Lamin A/C与卵巢癌侵袭转移相关。同时，应用生物信息学方法(3个独立软件Target Scan、DIANA-miroT、PicTar)分别预测Ezrin、Lamin A/C3'UTR有结合位点的miRNA，结果3个软件同时显示miR-205在Ezrin、Lamin A/C的3'UTR均有结合位点。由此推测miR-205、差异蛋白Ezrin和Lamin A/C间存在着调控关系，在卵巢癌侵袭转移中发挥着重要作用。 本文旨在探究miR-205对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响，以及miR-205表达与差异蛋白Ezrin和Lamin A/C间的关系。 方法:(1)培养人上皮性卵巢癌细胞系HO-8910(低转移株)、HO-8910pm（高转移株）、SKOV-3(低转移株)及SKOV-3ip（高转移株）4株配对的细胞系。 (2) Real-time PCR检测miR-205在四株细胞中的本底水平。 (3) Real time PCR检测瞬时转染miR-205mimics/inhibitor后四株细胞中miR-205的表达，验证是否转染成功。 (4) Transwell迁移实验、侵袭实验比较细胞转染前后迁移和侵袭能力变化。 (5)增殖实验（MTT法）比较各组细胞转染前后增殖能力差异。 (6)平板克隆形成实验比较各组细胞转染前后克隆形成率变化。 (7) Western Blot检测转染前后靶蛋白Lamin A/C、Ezrin的表达水平变化。 结果:(1)在培养条件、接种数目、时间相同情况下，HO-8910pm和SKOV-3ip比HO-8910和SKOV-3细胞数目多、生长速度快。 (2)miR-205在HO-8910pm、SKOV-3ip中表达水平高于HO-8910、SKOV-3。 (3)与miR-205 control组相比，转染miR-205mimics后的HO-8910、SKOV-3中miR-205的表达水平上升(P＜0.05);转染miR-205 inhibitor后的HO-8910pm、SKOV-3ip中miR-205表达水平下降(P＜0.05)。 (4)与miR-205 control组相比，转染miR-205mimics后的HO-8910、SKOV-3细胞迁移和侵袭能力增强(P＜0.05);转染miR-205 inhibitor后的HO-8910pm、SKOV-3ip中细胞迁移和侵袭能力减弱(P＜0.05)。 (5)与miR-205 control组相比，转染miR-205mimics后的HO-8910细胞增殖能力增强(P＜0.05);转染miR-205mimics后的SKOV-3细胞增殖能力增强，但差异无统计学意义(P＞0.05);转染miR-205 inhibitor后的H0-8910pm、SKOV-3ip细胞增殖能力减弱，但差异无统计学意义(P＞0.05)。 (6)与miR-205 control相比，转染miR-205mimics后的HO-8910、SKOV-3克隆形成数增多;与miR-205control相比，转染miR-205 inhibitor后的HO-8910pm、SKOV-3ip克隆形成数减少(P＜0.05)。 (7)与miR-205 control组相比，转染miR-205mimics后的HO-8910、SKOV-3中LaminA/C、Ezrin表达水平下降;转染miR-205 inhibitor后的HO-8910pm中Lamin A/C、Ezrin表达水平增高;SKOV-3ip转染前后LaminA/C、Ezrin表达水平无明显变化。 结论:(1) miR-205能增强卵巢癌细胞的增殖、迁移与侵袭能力。 (2) miR-205能下调卵巢癌细胞中Lamin A/C、Ezrin蛋白表达水平。 (3) miR-205促卵巢癌侵袭的部分途径是通过调控Lamin A/C、Ezrin蛋白表达水平实现的。
卵巢癌;miR-205;生物学行为;细胞增殖;差异蛋白
中南大学
硕士
基础医学
吴晓英
2014
中文
R737.31
60
2015-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）