鞣花酸对骨髓瘤SP2/0细胞的生物学作用
目的:本研究课题以小鼠骨髓瘤SP2/0细胞株作为研究对象，运用了体外细胞培养和分子生物学技术等科研方法，探索鞣花酸对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响并检测与癌细胞发生、发展密切关联的肿瘤相关分子COX-2的表达情况。通过分析鞣花酸对小鼠骨髓瘤SP2/0细胞的生物学作用，为临床手术治疗MBD，有效清除病灶内骨髓瘤细胞提供实验依据。 方法:体外培养小鼠骨髓瘤SP2/0细胞，设立3个阶梯浓度药物组和1个对照组，对照组不用鞣花酸干预，实验组分别加入20，40和60μg/ml鞣花酸干预。1、用倒置显微镜观察，不同浓度鞣花酸处理的实验组和对照组骨髓瘤SP2/0细胞48h后的细胞形态学变化并拍照。2、用20，40和60μg/ml鞣花酸处理骨髓瘤SP2/0细胞48h后，采用Hoechst33258染色法染色，然后在倒置荧光显微镜下对比实验组与对照组细胞的凋亡情况并拍照。3、通过细胞增殖实验（MTT法）检测以上浓度鞣花酸处理48h后的SP2/0细胞的细胞增殖情况及细胞活性。4、收集以上4组处理24h后的SP2/0细胞，用流式细胞仪检测鞣花酸对骨髓瘤SP2/0细胞早期凋亡的影响。5、用流式细胞仪测定，以上浓度药物处理48h后的SP2/0细胞各个细胞周期中的细胞比率。6、通过Western blotting技术检测肿瘤增值与凋亡相关蛋白COX-2在不同浓度药物处理后的SP2/0细胞中表达量的变化。 结果:1、不同浓度药物处理48h后的SP2/0细胞与对照组相比，随鞣花酸浓度的增高，有活性的贴壁细胞数量逐渐减少，同时培养液中漂浮的死亡细胞不断增多。2、在倒置荧光显微镜下观察Hoechst33258染色后的细胞，对照组细胞核呈现弥散、均匀的蓝色荧光，实验组随药物浓度增加染色细胞数量逐渐减少并且在细胞中可见浓染的致密荧光。3、细胞增殖实验发现，20，40和60μg/ml鞣花酸孵育组细胞生长抑制率分别为(21.18±5.92)％，(44.58±3.43)％和(70.15±2.90)％，与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。4、细胞早期凋亡率检测，实验组SP2/0细胞的早期凋亡率分别为(9.60±0.56)％，(19.30±1.51)％和(35.10±5.26)％，与对照组(3.23±0.85)％比较，p＜0.01，差别具有统计学意义。5、细胞周期分析显示，鞣花酸孵育骨髓瘤SP2/0细胞株48h后，细胞周期阻滞于G1期，G1期细胞百分率分别为(55.21.±3.01)％，(64.48±0.43)％，(75.10±2.46)％，与对照组的(34.04±1.74)％相比，差异有统计学意义(P＜0.01)。6、Western blotting技术检测到，随药物浓度的增加，COX-2的蛋白表达量逐渐降低。 结论:鞣花酸能够抑制小鼠骨髓瘤SP2/0细胞的增殖，促进凋亡并可将其阻滞于G1期。这一过程发生机制可能与SP2/0细胞中COX-2的表达量下降有关，说明鞣花酸具有潜在的抗骨髓瘤生物学功能。
鞣花酸;骨髓瘤;SP2/0细胞;生物学功能
桂林医学院
硕士
外科学
严冬雪
2014
中文
R733.3
58
2014-11-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）