脂多糖刺激对奶牛输卵管上皮细胞PGE2和PGF2α合成分泌的影响研究
前列腺素E2是一种重要的炎性介质，是由环氧合酶催化花生四烯酸代谢产生的一种二十碳不饱和脂肪酸，当机体组织器官受到细菌毒素侵害后，细胞产生包括前列腺素E2在内的大量的炎症介质。本实验通过利用细菌脂多糖刺激奶牛输卵管上皮细胞，检测与前列腺素E2和F2α有关的合成酶的表达状况，以及脂多糖对前列腺素E2和F2α合成分泌的影响。旨在阐明感染G-致病菌时，奶牛输卵管过量分泌前列腺素E2和F2α的病理学机制，为治疗由炎症引起的输卵管分泌失调病症搜集基础实验数据。 方法:1）建立奶牛输卵管上皮细胞体外培养技术。2）不同浓度1μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、7.5μg/mL、10μg/mL的LPS作用于奶牛输卵管上皮细胞培养24 h，采用实时荧光定量PCR技术检测COX-1、COX-2 mRNA表达量，以确定LPS的最佳作用浓度。3）采用实时荧光定量PCR技术检测LPS不同作用时间(2h、4h、8h、16h、24h、48h、72 h)对奶牛输卵管上皮细胞COX-1、COX-2、mPGES-1、mPGES-2、cPGES和PGFS mRNA表达的影响。4）采用实时荧光定量PCR技术检测COX抑制剂、NF-κB抑制剂和LPS刺激对奶牛输卵管上皮细胞前列腺素合成酶表达量变化。5）采用ELISA方法检测5μg/mL LPS在不同作用时间(2h、4h、6h、8h、12h、16h、24 h、36 h、48 h、72 h)和不同抑制剂刺激对奶牛输卵管上皮细胞合成分泌PGE2和PGF2。的影响，并分析LPS对奶牛输卵管上皮细胞生成PGE2/PGF2。含量比例的影响。 结果:首先，成功培养奶牛输卵管上皮原代细胞及传代细胞。其次，用LPS刺激奶牛输卵管上皮细胞后，COX-1、COX-2 mRNA表达量显著升高，且呈现浓度依赖性。第三，5μg/mL LPS作用于奶牛输卵管上皮细胞后，COX-1 mRNA表达量在16h最高值;COX-2 mRNA表达量在2h最高值，证明LPS可快速诱导COX-2 mRNA表达;mPGES-1 mRNA表达量在16～72 h显著升高;mPGES-2 mRNA表达量在16～72h显著升高;cPGES mRNA表达量在4～72 h显著升高;PGFS mRNA表达量在8～16h显著升高。第四，5μg/mL LPS作用于奶牛输卵管上皮细胞后，能够改变奶牛输卵管上皮细胞PGE2和PGF2α的生成，使其PGF2α占主导改变为PGE2占主导。第五，NF-κB抑制剂和COXs抑制剂均能抑制LPS诱导的前列腺素合成酶表达以及PGE2和PGF2α合成分泌。 结论:LPS通过NF-κB途径调控COX-1、COX-2、mPGES-1、mPGES-2、cPGES及PGFS的表达和PGE2、PGF2α的合成分泌，而且LPS诱导调控过程中内源性前列腺素发挥着必不可少的关键作用。LPS刺激可诱导PGE2/PGF2α的生成比例失调而影响正常输卵管微环境平衡。
奶牛输卵管上皮细胞;环氧合酶;前列腺素;病理学机制
内蒙古农业大学
硕士
基础兽医学
曹金山
2014
中文
S858.23
57
2014-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）