猪繁殖与呼吸综合征病毒不同变异株RT-PCR鉴别诊断方法的建立及流行病学调查
猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndromevirus，PRRSV)引起的一种高度传染性疾病，可导致妊娠母猪流产、早产、死胎、木乃伊胎等繁殖性能障碍以及各年龄段猪的呼吸系统功能障碍。 2006年我国发生的“猪高热综合征”(porcine high fever syndrome，PHFS)，经鉴定其病原为NSP2基因高变区发生了不连续的90bp缺失的高致病PRRSV(HP-PRRSV)。最新研究表明高致病性PRRSV除具有不连续90bp的缺失情况以外，还在与本缺失区域相近的位置存在有36bp或57bp的缺失情况（以下将这几种缺失情况分别称为90bp缺失、36bp缺失和57bp缺失）。本研究建立一种鉴别不同变异株的RT-PCR方法，用该方法对目前PRRSV不同变异毒株的流行情况进行调查研究，以摸清临床PRRSV变异毒株的流行情况。 根据本实验室的研究结果及GenBank上已公布的序列，设计引物，其产物为:a.经典毒株未发生任何碱基缺失，扩增条带大小为300bp;b.部分高致病性PRRSV具有不连续的90bp的碱基缺失，扩增条带大小为210bp;c.另外一部分PRRSV存在连续的57bp缺失的情况，扩增条带大小为153bp，利用本试验方法对猪瘟病毒、伪狂犬病毒、圆环病毒、流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒进行特异性试验验证，利用本方法对山东省多个地区的样品进行流行性病学调查，以了解PRRSV经典株及不同缺失情况的高致病株的流行情况。本研究共对182份样品进行了检测，其中有84份病料样品和98份血清样品。 结果表明，成果建立鉴别不同变异株的RT-PCR方法，其特异性试验、重复性试验良好，可检测经典株PRRSV、HP-PRRSV及混合感染情况下的最低cDNA浓度为0.01ng/ul、0.05ng/ul、2.1ng/ul。运用所建立套式PCR检测方法对182份样品进行检测，结果表明其中有176份样品扩增结果为阳性。在这176份阳性样品中，确定为PRRSV经典毒株的共有2份，占阳性总样品数的1.1％;其中有81份样品仅检测到不连续的90bp缺失的高致病性PRRSV，占阳性样品数的46％;仅有8份样品检测到有连续57bp缺失的高致病性PRRSV的，占阳性样品数的4.5％;90bp缺失和57bp缺失的样品有84份，占阳性样品数的47.7％;仅有1份样品存在90bp缺失和57bp缺失的高致病性PRRSV混合感染且感染经典株PRRSV占阳性样品数的0.6％，调查中未发现其它情况。本次调查结果表明，生产一线中的经典株PRRSV所占比例较小，而高致病PRRSV占总调查样品数的绝大多数，其中高致病性毒株的缺失情况普遍，说明PRRSV的变异仍十分严重。
猪繁殖与呼吸综合征病毒;变异株;鉴别诊断;流行性病学调查
山东农业大学
硕士
兽医
肖一红
2014
中文
S858.28
69
2014-10-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）