IL-10通过P38MAPK信号通路介导IL-1β对肺成纤维细胞ICAM-1的表达
目的:本研究以大鼠胚肺成纤维细胞为研究对象，通过对其ICAM-1表达水平及P38MAPK磷酸化水平的观察，探究IL-1β通过P38MAPK信号通路对ICAM-1表达水平的影响及IL-10对该影响作用的干预，进一步了解肺纤维化的部分发病机制，为临床治疗新思路提供依据。 方法:采用组织切块培养技术对Wistar鼠胚肺成纤维细胞进行培养:将临产Wistar孕鼠吸入乙醚麻醉后，立刻取出胎鼠，将胎鼠肺组织取出后修剪为1mm3左右的小块并加入含胎牛血清(20％)的DMEM培养基;培养条件:恒温37℃，95％空气及5％C02混合气体，湿度饱和，培养4至6小时，一周左右后开始传代，至5-6代后待所培养的肺成纤维细胞贴壁生长且结构特征、外部形态及生长状态基本一致遂进行下一步实验。 首先将实验用肺成纤维细胞以1×105/ml在预先放置有6mm×22mm盖玻片（已消毒）的6孔板中进行接种;之后置于细胞培养箱中孵育至达到细胞80％-100％融合，弃掉原培养液并加入新培养液（不含胎牛血清），进一步培养12小时，待G0期细胞基本同步化时，将实验细胞分为三组，每组6复孔。分组情况:(1)对照组:单纯加入DMEM培养液培养鼠胚肺成纤维细胞，共6小时;(2)IL-1β干预组:加入含IL-1β15ng/ml的培养液培养鼠胚肺成纤维细胞，共6小时;(3) IL-10+IL-1β干预组:加入IL-1010ng/ml及IL-1β15ng/ml共同刺激肺成纤维细胞6小时。 以RT-PCR法检测肺成纤维细胞ICAM-1mRNA表达水平，以Western-Blot法检测肺成纤维细胞P38MAPK磷酸化水平。 结果: 1.对Wistar胎鼠的原代肺成纤维细胞培养成功实验以组织切块培养法进行Wistar胎鼠的肺成纤维细胞培养，最后得到比较理想的生长状况较好的肺成纤维细胞实验模型，其细胞间形态较为一致，胞质均匀，胞体丰满，核仁及核分裂相清晰可见。 2.RT-PCR法对肺成纤维细胞中ICAM-1 mRNA表达水平的测定ICAM-1 mRNA电泳条带的光密度扫描显示:对照组的肺成纤维细胞中ICAM-1 mRNA有一定量的基础表达，但其表达量较低，为（0.361±0.045）; IL-1β干预组的ICAM-1 mRNA的表达量为（0.848±0.039），与对照组相比明显升高（P＜0.01）;IL-10+IL-1β联合干预组ICAM-1 mRNA的表达量为（0.740±0.026），明显低于IL-1β干预组的表达量(P＜0.01)，但与对照组相比其表达量有所升高(P＜0.01)。 3.WesternBlot法测定肺成纤维细胞P-P38蛋白表达水平的变化磷酸化P38(P-P38)蛋白在肺成纤维细胞中存在基础表达，对照组为(0.581±0.034); IL-1β干预组P-P38蛋白表达为(1.196±0.038)，明显高于对照组(P＜0.01); IL-10+IL-1β联合干预组P-P38蛋白表达为(0.780±0.028)，明显低于IL-1β干预组（P＜0.01），但高于对照组，具有统计学意义（P＜0.01）。 结论: 1.正常的肺成纤维细胞中ICAM-1表达量较低; 2.IL-1β可以上调肺成纤维细胞ICAM-1的表达，使其显著上升，这种作用可能通过对P38MAPK通路的上调实现; 3.IL-10可能通过抑制IL-1β对P38MAPK的上调作用而抑制其对肺成纤维细胞ICAM-1的表达的刺激。
肺纤维化;肺成纤维细胞;P38MAPK信号通路;核因子10;ICAM-1表达;发病机制
河北医科大学
硕士
内科学
袁雅冬
2014
中文
R563.3;R363.272
49
2014-10-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）