内皮祖细胞在sepsis发展中的作用及机制研究
目的: 检测成人外周血内皮祖细胞(cEPCs)的正常值，为开展相关研究奠定基础;通过临床、动物研究观察和分析sepsis时cEPCs数量变化及其意义，并初步探讨其机制;探讨外源性EPCs对sepsis的影响，以期阐明其在炎性组织损伤发生中的作用。 方法: 排除已知影响因素，以CD34+/CD133+/VEGFR-2+为表型标志，采用流式细胞学方法(FCM)检测健康成人cEPCs数量，统计并确立正常值范围;对排除已知影响因素的35例入选sepsis患者（2006.11-2008.1，上海交通大学医学院附属瑞金医院SICU），于不同时点(发病后2d内、3、7、14、21d)采用FCM检测 cEPCs数量，同时分别采用ELISA和免疫浊度法检测血浆TNF-α、IL-10、D-二聚体和血清AT-Ⅲ水平;建立大鼠sepsis模型，动态观察（制模后0h、6h、12h、18h、1d、2d、3d、7d）上述指标变化，同时分别采用湿/干重比和荧光素钠法观察组织毛细血管渗漏程度。常规病理学观察组织损伤状况并评分;观察SDF-1α、VEGF、LPS、TNF-α、对离体EPCs增殖（MTT法）和凋亡(FCM)的影响;将体外培养的EPCs注入sepsis动物模型体内，进一步观察TNF-α、IL-10、D-二聚体、AT-Ⅲ水平变化，及毛细血管渗漏及组织损伤程度。 结果: 健康成人cEPCs的正常参考范围是85.3～1073.1个/106PBMCs(160.4～1979.0个/mL)，不同年龄及性别组其数量没有显著差异;不同预后sepsis患者cEPCs变化呈现不同规律，存活患者sepsis发生2d后，cEPCs数量明显升高(p＜0.01)，发病7d达到高峰，此后逐步降低，21d至正常水平，于此同时伴有循环高水平TNF-α、IL-10、D-二聚体和AT-Ⅲ(p＜0.01)，并与cEPCs水平呈正相关(p＜0.01)，而死亡患者在整个疾病过程中cEPCs持续处于低水平(p＜0.05); sepsis诱发后，大鼠cEPCs数量明显增加(p＜0.01)并伴有循环TNF-α、IL-10、D-二聚体、AT-Ⅲ升高，以及肝、肾、肺湿/干重比、组织荧光素钠强度增加和组织损伤加重，cEPCs数量与上述各指标变化均呈正相关(p＜0.01);SDF-1α和VEGF促进离体培养EPCs的增殖(p＜0.05)，而LPS和TNF-α明显抑制EPCs增殖并促使其凋亡(p＜0.05);给sepsis动物静脉输注外源性EPCs后，其循环TNF-α、D-二聚体水平及肝、肺湿/干重比、组织荧光素钠强度明显降低(p＜0.05)，组织病理损伤减轻(p＜0.05)。 结论: 1.以CD34+/CD133+/VEGFR-2+为表型标记，采用FCM检测方法，健康成年人cEPCs数量的正常范围是85.3～1073.1个/106PBMCs(160.4～1979.0个/mL)。 2.不同预后sepsis，cEPCs呈截然不同变化，其变化与疾病预后和炎症反应程度相关，并具有一定的评估和预测价值，其变化可能源于动员/抑制因子稳态失衡。 3.外源性EPCs显著降低sepsis时机体炎症反应程度，减轻毛细血管渗漏及组织损伤。 4.sepsis时cEPCs数量升高是机体组织损伤的反应性保护机制。
内皮祖细胞;脓毒病;炎症反应;毛细血管渗漏;组织损伤;发病机制
上海交通大学
博士
外科学
汤耀卿
2008
中文
R631
99
2014-09-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）