Surfactin对脂多糖诱导巨噬细胞分泌炎性因子的影响
传统的抗炎药物对人体器官和组织均有毒副作用，许多研究表明，surfactin对机体损伤较低，不易产生耐药性，且可提高人体免疫力。本论文以小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象，检测surfactin对巨噬细胞分泌炎性因子的影响及相关通路的调节作用，揭示surfactin的抗炎活性及机制。 使用MTT法测定巨噬细胞的增殖指数;中性红法测定巨噬细胞的吞噬活性;试剂盒测定巨噬细胞分泌NO的量;扫描电镜、AO染色和糖原染色观察巨噬细胞形态学变化、核酸和糖原代谢情况;RT-PCR检测炎性因子TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-12的基因表达以及iNOS和COX-2的基因表达;Westernblot测定TLR4、NF-κB和MAPK通路蛋白的表达。 MTT结果表明，60和80μg/mL的surfactin作用巨噬细胞24h，增殖指数达到108.5％和113.0％;5μg/mL的脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞24h，增殖指数达到137.0％，surfactin和LPS共同作用巨噬细胞，与LPS组相比，80μg/mLsurfactin使细胞增殖指数达到150.8％，surfactin与LPS在所使用剂量范围内对巨噬细胞无毒性。Surfactin能够显著抑制LPS诱导巨噬细胞的吞噬活性和NO的分泌量，最佳抑制浓度为60μg/mL，该浓度对吞噬活性的抑制率为47.6％(p＜0.01)，使NO分泌量由59.6μmol/L降至18.7μmol/L(p＜0.01)。Surfactin能够显著抑制LPS诱导巨噬细胞的形态学变化，并降低LPS诱导巨噬细胞核酸和糖原的代谢水平。Surfactin能够显著抑制LPS诱导巨噬细胞TLR4蛋白的表达，60μg/mL的surfactin使TLR4蛋白水平下降38.4％(p＜0.01)。Surfactin对LPS诱导巨噬细胞炎性因子和相关合酶的表达水平有显著抑制作用，60μg/mLsurfactin对TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-12以及iNOS和COX-2mRNA表达水平的抑制率分别为83.3％、80.4％、55.4％、55.8％、63.9％和66.3％(p＜0.01)。Westernblot结果显示，surfactin能够显著抑制LPS诱导巨噬细胞IκB-α的降解和NF-κBp65转位入核;surfactin能够显著抑制LPS诱导巨噬细胞MAPK家族ERK1/2、p38和JNK的磷酸化。 Surfactin能够显著抑制LPS诱导巨噬细胞的吞噬活性、分泌NO和TLR4蛋白的表达，能够显著抑制炎性因子的分泌及iNOS和COX-2的表达，并且通过调节NF-κB和MAPK通路来实现抗炎作用。
抗炎药物urfactin;巨噬细胞;炎性因子;脂多糖;丝裂原活化蛋白激酶
天津科技大学
硕士
营养与食品卫生学
曹小红
2012
中文
R978.1;R967
67
2014-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）