四环素酶联免疫检测方法的研究
本论文对检测动物源性食品中四环素残留的间接竞争酶联免疫检测方法进行了系统的研究。 采用甲醛法将四环素与钥孔血蓝蛋白偶联制备人工免疫原。通过免疫新西兰大白兔得到抗血清，使用ProteinASepharose-4B亲和层析法纯化血清得到高效价和高特异性的抗四环素多克隆抗体。采用甲醛法将四环素与卵血清白蛋白连接制备包被原，建立了间接竞争酶联免疫检测方法，对影响实验的各因素（包被量，抗体稀释度，抗体稀释液等）进行了优化与研究，最终确定包被量为0.05μg/孔，抗体稀释度为1∶10000，抗体稀释液为0.1％BSA/PBS，封闭液为0.5％乳粉/PBS溶液时所获得的标准曲线灵敏度最高，稳定性最好。本实验所建立方法的灵敏度(IC50)为0.33±0.09μg/L，最低检出限(IC15)为0.01±0.004μg/L。本实验所制备的抗体具有良好的特异性，与两种结构类似物土霉素、金霉素交叉反应率分别为0.39％和4.42％，与其他常用兽药青霉素、链霉素、氯霉素均无交叉反应。 选择牛奶、蜂蜜、猪肉、牛肉、鸡肉、鱿鱼、大眼鲷鱼、比目鱼、虾作为样品进行添加回收实验，牛奶添加回收率为85.88％-109.17％，蜂蜜添加回收率为94.52％-107.59％，猪肉添加回收率为84.19％-98.96％，牛肉添加回收率为75.91％-105.58％，鸡肉添加回收率为84.40％-109.64％，鱿鱼添加回收率为73.08％-115.44％，大眼鲷鱼添加回收率为67.45％-104.76％，比目鱼添加回收率为74.55％-112.46％，虾添加回收率为82.84％-111.85％。本实验所建立的方法在牛奶、鱿鱼中检出限为5μg/kg，蜂蜜、猪肉、牛肉、鸡肉、大眼鲷鱼、比目鱼、虾检出限为10μg/kg，板内变异和板间变异均小于20％。使用国外试剂盒验证本实验建立的四环素间接竞争酶联免疫法，两种方法的检测结果一致性很高，其线性回归方程为:y=0.8542x+2.2848，线性相关系数R2=0.9954。说明本研究建立的方法具有很好的准确性和精密度。 本研究所建立的四环素间接竞争酶联免疫检测方法灵敏度高、特异性好、准确性高、样品前处理简单，适合于动物源性食品中四环素残留的快速检测。
四环素;残留物检测;酶联免疫法;动物源性食品
天津科技大学
硕士
营养与食品卫生学
王硕
2012
中文
TS207.53;Q503
64
2014-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）