AM激活mTOR信号通路对人卵巢癌细胞增殖的影响
前言： 卵巢癌(Ovarian carcinoma)是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于宫颈癌和子宫内膜癌而居第三位，但死亡率却居妇科肿瘤之首，由于其症状不典型，早期不容易发现，确诊时大多已处于晚期，盆腹腔广泛转移病灶，无法彻底切除，预后差，5年存活率仅为20％-30％。虽然经过包括肿瘤细胞减灭术和以铂类和/或紫杉醇为基础的规范化治疗，但仍有部分患者因为化疗不敏感、耐药、复发等，使治疗效果不佳。因此，卵巢癌的早期诊断和治疗、抑制肿瘤的复发和转移，仍旧困扰着所有妇科肿瘤工作者。卵巢癌的发病机制十分复杂，现代分子生物学研究表明:恶性肿瘤的发生、发展不仅与肿瘤细胞的异常增殖、分化及细胞凋亡抑制有关，而且与信号转导机制异常有关。肾上腺髓质素(Adrenomedullin,AM)最初是从人嗜铬细胞瘤中分离出的一种多肽类物质，Miller MJ等首先报道肾上腺髓质素是肿瘤细胞的自分泌生长因子，他们观察了肺、前列腺、脑、软骨、乳腺癌、卵巢的人的肿瘤细胞系，发现95％的肿瘤细胞能够产生肾上腺髓质素，并发现其抑制剂能明显抑制细胞的生长，而且这种抑制作用可被外源性肾上腺髓质素的增加而削减。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是近年来发现的一种进化上高度保守的蛋白激酶，mTOR是生长因子和营养信号的整合器，它整合上游的多种信号进而调节细胞的生长。某些刺激因子作为胞外或胞内影响因子，通过不同的细胞表面受体或靶蛋白，将信号转导至mTOR或直接作用于其下游效应器，进而调节细胞的生长和增殖。mTOR信号通路在细胞生存、生长与增殖中起着关键调控作用，该信号通路的异常与多种恶性肿瘤有关。然而AM在卵巢癌中是否通过mTOR信号通路发挥作用目前尚未见报道。前期实验已证实:PI3K/AKT信号转导通路是AM的重要传导通路之一，是细胞信号转导的重要途径，与恶性肿瘤增殖密切相关。 本实验采用CCK-8法及Western印迹法检测AM对卵巢癌细胞系HO8910增殖及对mTOR磷酸化激活的作用，旨在揭示AM激活mTOR信号通路是AM促进卵巢癌细胞的增殖的重要机制，mTOR信号通路的拮抗剂rapamycin可在一定程度上抑制由AM导致的卵巢癌细胞增殖，进而为卵巢癌的生物治疗提供新的思路。 材料与方法： 1、实验材料 本实验使用的卵巢癌细胞系HO8910有中国医科大学细胞生物教研室提供。 2、实验方法 应用AM及雷帕霉素(rapamycin，mTOR信号通路拮抗剂)诱导卵巢癌细胞系HO8910，应用CCK8检测AM及rapamycin对卵巢癌细胞增殖的影响，进一步采用Western印迹方法，测定AM对mTOR磷酸化激活的作用。 3、统计学方法 实验数据以(x)±S表示，采用SPSS17.0统计软件进行独立样本t检验及相关分析，p＜0.05表示差异有统计学意义。 结果： 1、AM促进卵巢癌细胞增殖，呈剂量依赖关系 我们首先探讨了AM对卵巢癌细胞增殖的直接作用。CCK-8检测显示:AM促进卵巢癌细胞的增殖，AM四种不同浓度均表现为促进肿瘤增殖的作用，并且有明显的剂量依赖关系，因此可以看出AM促进卵巢癌细胞系的增殖，两者之间存在剂量依赖关系，从而从细胞水平上证实AM在对卵巢癌细胞的增殖起直接促进作用。 2、AM激活卵巢癌细胞mTOR的磷酸化活性 我们进一步探讨了AM促进卵巢癌细胞增殖的可能机制。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)是一个信号整合的中心分子，它可以调节细胞生长、细胞周期和细胞分化，是这些基本的生理过程中高度保守的中心调节分子，磷酸化为其激活形式。Western印迹方法显示:给予AM(10-8mol/L)处理可以显著激活卵巢癌细胞中mTOR的磷酸化水平。 3、mTOR信号通路拮抗剂rapamycin可在一定程度上抑制由AM导致的卵巢癌细胞增殖 CCK8法结果显示:给予mTOR抑制剂rapamycin后，可以显著抑制AM诱导的卵巢癌细胞的增殖。因此AM可能通过mTOR信号途径促进卵巢癌细胞的增殖。 结论： 1、AM激活mTOR信号通路是促进卵巢癌细胞的增殖的重要机制。 2、mTOR信号通路的拮抗剂rapamycin可在一定程度上抑制由AM导致的卵巢癌细胞增殖。
卵巢癌;细胞增殖;肾上腺髓质素;mTOR信号通路
中国医科大学
硕士
妇产科学;妇科学
郭科军
2013
中文
R737.31;R730.2
42
2014-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）