辐射抗拒性食管癌细胞系TE-1R的建立及辐射抗性的初步研究
目的：建立具有辐射抗拒性食管癌细胞系TE-1R，初步探讨辐射抗性的食管癌细胞系TE-1R的辐射抗性与RPA1的关系。研究辐射抗性食管癌细胞系TE-1R的增殖抑制率、凋亡率，初步探讨TE-1R辐射抗性的机理。观察RPA1 mRNA和蛋白在人食管癌细胞TE-1和TE-1R中的表达情况，为以RPA1为靶点的分子靶向放疗增敏提供体外实验研究依据。 方法：分次、间歇照射的方法(2Gy5次)诱导人食管癌细胞系TE-1产生具有稳定辐射抗拒性的细胞亚系TE-1R，在倒置显微镜下观察其细胞形态学差异。分别以TE-1R、TE-1为实验组和对照组，给予6MVX射线单次照射2 Gy，用噻唑蓝(MTT)比色法检测实验组和对照组细胞的增殖抑制;采用流式细胞仪(FACS)检测实验组和对照组细胞凋亡率;采用westernblot检测实验组和对照组的细胞RPA1蛋白表达水平;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测实验组和对照组细胞中RPA1 mRNA表达水平。 结果：利用X线间歇、多次照射食管癌细胞TE-1，筛选出在形态学及放射生物学参数都稳定的放射抗拒性食管癌细胞系TE-1R;2 Gy射线照射后，TE-1R细胞的增殖抑制率低于TE-1细胞，TE-1R的倍增时间长于TE-1的倍增时间，2Gy照射后12h、24h和48 h TE-1R细胞的凋亡率低于TE-1的凋亡率，其差异具有显著性(P＜0.05)。RPA1 mRNA及其蛋白在食管癌TE-1细胞中均有表达，Western blot结果显示:对照组RPA1蛋白表达较高(0.42±0.011)％，实验组RPA1蛋白表达较对照组高（0.89±0.017）％，统计学有显著性差异(P＜0.05)％。RT-PCR结果显示:对照组RPA1mRNA表达较弱(0.65±0.012)％，实验组RPA1 mRNA表达较对照组较高（0.89±0.018）％，其差异具有显著性(P＜0.05)。 结论：1.成功的建立了辐射抗性的食管癌细胞系TE-1R;2.食管癌TE-1R细胞的增殖抑制率比TE-1细胞低，放射诱导的凋亡率降低，说明TE-1R细胞比TE-1细胞对射线更加抗拒;3.食管癌TE-1细胞中存在RPA1 mRNA及其蛋白的表达，RPA1在食管癌细胞DNA双链断裂的修复中起着一定的作用，RPA1 mRNA和蛋白在辐射抗拒性的TE-1R细胞中的表达比TE-1细胞中高，可能是照射后食管癌细胞产生辐射抗拒性的机制之一。
食管癌;增殖抑制率;凋亡率;分子靶向放疗;辐射抗拒性;增敏机制
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
肿瘤学
顾玉明
2013
中文
R735.1
59
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）