MicroRNA34a靶向Notch1影响乳腺癌细胞对阿霉素药物的敏感性
目的:1.研究miR34a对Notch1的靶向作用;2.通过miR34a过表达或抑制其表达来检测乳腺癌细胞对阿霉素药物的敏感性。 方法:1.实时荧光定量PCR检测miR34a在MCF-7和MCF-7/ADR乳腺癌细胞中的表达情况,进一步验证是否与芯片结果相符。2.使用Lipofectamine2000对2株细胞分别转染miR-34a mimics或inhibitor。3.Westemblot和实时荧光定量PCR等方法检测转染前后2组细胞中Notch1蛋白及其mRNA的表达情况。4.MTT实验、细胞凋亡实验等方法观察miR34a过表达或被抑制是否影响乳腺癌细胞对阿霉素药物的敏感性。5.实时荧光定量PCR检测新辅助化疗的乳腺癌组织标本中miR34a和Notch1的表达情况以及与化疗疗效的关系。6.统计学分析实验结果均经SPSS16.0软件统计。各实验至少独立重复3次,重复性好。数据以平均数±标准差表示,组间比较采用方差分析。相关性分析采用Spearman相关分析。以P<0.05表示有统计学意义。 结果:1.miR34a在MCF-7/ADR乳腺癌细胞中的表达较MCF-7亲代细胞中的表达显著下调,与芯片结果相符。2.MCF-7/ADR细胞转染miR-34a mimics后Notch1蛋白及其mRNA的表达下调;MCF-7细胞转染miR-34a inhibitor后Notch1蛋白及其mRNA的表达上调。3.miR34a过表达后MCF-7/ADR细胞对阿霉素的IC50(半数抑制量)降低,细胞凋亡增加;抑制miR34a的表达后MCF-7细胞对阿霉素的IC50升高,细胞凋亡减少。4.新辅助化疗的乳腺癌组织标本中miR34a的表达量与化疗疗效呈正相关;Notch1的表达量与化疗疗效呈负相关;而miR34a与Notch1的表达呈负相关。 结论:1.miR34a正向调控Notch1在mRNA和蛋白水平的表达。2.miR34a过表达可增加乳腺癌细胞对阿霉素的敏感性。
乳腺癌;阿霉素;敏感性;化疗疗效
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
肿瘤学
唐金海
2013
中文
R737.9
65
2014-02-25(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)