LKB1基因转染对肺癌细胞生物学行为的影响及放射增敏作用研究
目的：利用pEGFP-LKB1融合蛋白质粒过表达肺癌A549、H460细胞，联合照射，研究野生型LKB1抑癌基因对肺癌细胞生物学行为影响及其放射增敏作用，为提高肺癌疗效提供一定实验依据。 方法：构建融合质粒pEGFP-LKB1并鉴定。利用脂质体将融合质粒pEGFP-LKB1转染人肺癌细胞株A549、H460，荧光显微镜下观察绿色荧光表达，Western blot检测LKB1蛋白的表达。CCK-8法、流式细胞术和划痕实验等方法检测LKB1转染对前述肺癌细胞株增殖、细胞周期分布、侵袭能力等生物学行为的影响。根据单靶多击模型和线性二次模型，集落形成实验绘制细胞存活曲线，计算D0、Dq、α/β和SER等放射生物学指标，检测LKB1的放射增敏作用;CCK-8法、流式细胞术测定细胞周期分布以及Wentern blot检测P53、P21蛋白表达，探讨LKB1基因可能的放射增敏机制。 结果：通过酶切鉴定和测序，证明pEGFP-LKB1融合质粒成功构建。转染LKB1基因后12、24、48、72 h，在荧光显微镜下观察发现，24 h时绿色荧光蛋白表达最多;Western blot检测显示转染后24 h，LKB1蛋白表达最强。CCK-8法检测显示，转染pEGFP-LKB1组OD值均小于空白组(Ctr)和阴性对照组(pEGFP)(P＜0.05)。流式细胞术检测中，结果显示转染pEGFP-LKB1组G0/G1期细胞比例高于空白组和阴性对照组(P＜0.05)，在24 h时细胞阻滞最明显。在细胞划痕实验中，转染组细胞划痕间距大于空白组(P＜0.05)，H460细胞愈合现象比A549细胞明显。集落形成实验中，照射组和转染照射组相比，相同剂量时，转染照射组的集落形成率小于单纯照射组，随着剂量增加，集落形成率也逐渐减小。单靶多击模型和线性二次模型中求得生物学参数，A549细胞单独照射组和转染照射组分别为D0:2.759VS2.204; Dq:2.052VS1.333;α/β值:7.943 VS11.288; SER:1.25。H460细胞中，单独照射组和转染照射组，D0:2.675，VS2.425; Dq:2.041 VS1.467;α/β值:8.088 VS9.437，SER:1.103。在CCK-8实验中结果显示转染照射联合组抑制率都明显高于单纯照射组和单纯转染组(P＜0.05);流式细胞术检测发现，联合照射，LKB1基因转染可以使G2/M期细胞比例增高(P＜0.05)，在24 h时G2/M期阻滞最明显，H460细胞G2/M期阻滞比A549细胞更明显;Western blot检测P53和P21结果显示，转染照射组细胞P53表达最强，P21最弱。 结论：抑癌基因LKB1过表达可以抑制肺癌细胞株A549、H460的增殖、调控细胞周期分布、减弱其侵袭能力等;另外，LKB1能增加人肺癌细胞株的放射敏感性，其机制可能与增加细胞抑制率、抑制肿瘤细胞亚致死性损伤修复和促进肿瘤细胞周期再分布有关。
细胞增殖;细胞周期;放射治疗;肺癌;增敏作用
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
肿瘤学
章龙珍;姚元虎
2013
中文
R734.2
80
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）