FOXO3a在结直肠癌发生发展过程中的作用及其与Wnt通路相关蛋白关系的研究
目的:检测FOXO3a在结直肠癌组织及结直肠癌SW620细胞中的表达,观察FOXO3a在结直肠癌组织中的表达特点及其对SW620细胞增殖和迁移的影响,分析FOXO3a在结直肠癌发生发展过程中的作用;同时研究FOXO3a与结直肠癌侵袭转移密切相关信号通路Wnt相关蛋白(β-catenin、MMP-9、E-cadherin)之间的关系,初步探讨FOXO3a介导结直肠癌发生发展的机制。 方法:1.采用组织芯片技术结合免疫组化SP法检测FOXO3a、β-catenin、MMP-9和E-cadherin蛋白在112例结直肠癌组织和相应103例正常肠粘膜组织中的表达情况。2.Western blot检测FOXO3a、β-catenin、MMP-9和E-cadherin蛋白在20例新鲜结直肠癌组织和相应20例正常肠粘膜组织中的表达情况。3.培养人结直肠癌SW620细胞,设立未处理组、无关序列干扰组和FOXO3a序列干扰组,利用siRNA瞬时转染方法下调FOXO3a的表达,利用细胞克隆形成实验和transwell技术检测FOXO3a干扰前后SW620细胞增殖和迁移能力的变化;应用免疫细胞化学方法和Western blot检测FOXO3a干扰前后,β-catenin、MMP-9和E-cadherin在SW620细胞中的表达变化。 结果:第一部分:1.免疫组化结果和Western blot结果均显示,结直肠癌组织中FOXO3a蛋白的表达较正常肠粘膜组织降低(P<0.05),淋巴结转移组结直肠癌组织中FOXO3a蛋白的表达较无淋巴结转移组降低(P<0.001)。2.β-catenin蛋白在结直肠癌组织细胞核中的表达较正常肠粘膜组织升高(P<0.001),淋巴结转移组结直肠癌组织细胞核中β-catenin蛋白的表达较无淋巴结转移组升高(P<0.05)。3.免疫组化结果显示,结直肠癌组织中FOXO3a蛋白的表达与β-catenin蛋白核表达呈负相关(rn=-0.425;P<0.001)。4.结直肠癌组织中MMP-9蛋白的表达较正常肠粘膜组织升高(P<0.05),淋巴结转移组结直肠癌组织中MMP-9蛋白的表达较无淋巴结转移组升高(P<0.05)。5.免疫组化结果显示,结直肠癌组织中FOXO3a蛋白的表达与MMP-9蛋白的表达呈负相关(rn=-0.220,P<0.05)。6.结直肠癌组织中E-cadherin蛋白的表达较正常肠粘膜组织降低(P<0.01),淋巴结转移组结直肠癌组织中E-cadherin蛋白的表达较无淋巴结转移组降低(P<0.05)。7.免疫组化结果显示,结直肠癌组织中FOXO3a蛋白的表达与E-cadherin蛋白的表达呈正相关(rn=0.499,P<0.001)。第二部分:1.细胞克隆形成实验结果显示,与未处理组和无关序列干扰组相比,FOXO3a序列干扰组SW620细胞克隆数目明显增加(P<0.01)。2.Transwell结果显示,与未处理组和无关序列干扰组相比,FOXO3a序列干扰组SW620细胞迁移数目显著增加(P<0.001)。3.免疫细胞化学结果和Western blot结果均显示,干扰FOXO3a表达后,β-catenin在SW620细胞胞核中的表达增加(P<0.01),MMP-9蛋白在SW620细胞中的表达亦增加(P<0.001),而E-cadherin蛋白在SW620细胞中的表达降低(P<0.01)。 结论:1.结直肠癌组织中FOXO3a表达下降且随淋巴结转移的出现其表达进一步降低;在结直肠癌SW620细胞中下调FOXO3a的表达可以增强细胞的增殖和迁移能力,提示FOXO3a低表达可能参与结直肠癌的发生发展。2.结直肠癌组织中Wnt通路异常激活,而FOXO3a蛋白低表达能够促进Wnt通路的激活,提示FOXO3a蛋白低表达可能通过激活Wnt信号通路介导结直肠癌的发生发展。
结直肠癌;细胞增殖;侵袭转移;免疫组化SP法;组织芯片
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
病理学与病理生理学
吴永平
2013
中文
R735.3
81
2014-02-25(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)