IKKβ-FOXO3A-VEGF信号通路在As2O3抑制肿瘤血管生成中的作用和机制研究
目的：通过观察As2O3作用后胃癌MGC803细胞和人脐静脉内皮细胞HUVECs中IKKβ、FOXO3a和VEGF的表达变化，分析IKKβ-FOXO3a-VEGF信号通路在As2O3抑制肿瘤血管生成中的作用，探讨As2O3抑制肿瘤血管生成的分子机制。 方法：以人胃癌MGC803细胞、人脐静脉内皮细胞HUVECs为实验对象，给予4μmol/L As2O3处理，采用RNAi方法降低FOXO3a的表达。采用制备肿瘤条件培养基培养HUVECs细胞的方法模拟肿瘤微环境，利用CCK-8方法检测内皮细胞增殖情况;采用MGC803细胞和HUVECs细胞共培养的方法模拟肿瘤微环境，用transwell方法检测内皮细胞迁移数目，matrigel实验检测内皮细胞体外小管形成情况;采用ELISA方法检测肿瘤细胞培养上清液中VEGF的表达含量;采用Western blot方法和RT-PCR方法，分别在蛋白和mRNA水平检测IKKβ、FOXO3a和VEGF的表达。 结果：第一部分:1.CCK-8结果:(1)与FOXO3a siRNA组(41±10)％相比，As2O3组和control siRNA组HUVECs细胞体外增殖抑制率分别为(65±2)％和(69±4)％，抑制率均增加(P＜0.05)。(2)与CM FOXO3a siRNA组(14±2)％相比，CM As2O3组和CM control siRNA组HUVECs细胞体外增殖抑制率分别为(33±1)％和(32±1)％，抑制率均增加(P＜0.05)。2.Transwell结果:(1)与control组(213.33±1.36)相比，As2O3组、control siRNA组和FOXO3asiRNA组HUVECs细胞迁移数目(96.78±1.68，105.66±7.69，140.84±5.10)均减少(P＜0.05);与As2O3组和control siRNA组相比，FOXO3a siRNA组细胞迁移数目增加(P＜0.05)。(2)与Co-control组(212.00±4.67)相比，Co-As2O3组、Co-control siRNA组和Co-FOXO3a siRNA组HUVECs细胞迁移数目(80.00±4.91，92.44±5.60，134.33±6.17)均减少(P＜0.05);与Co-As2O3组和Co-controlsiRNA组相比，Co-FOXO3a siRNA组HUVECs细胞迁移数目增加(P＜0.05)。3.Matrigel结果:(1)与control组(28.44±0.39)相比，As2O3组、controlsiRNA组和FOXO3a siRNA组小管形成数目(7.89±2.50，10.44±3.02，17.36±9.09)均减少(P＜0.05); FOXO3a siRNA组较As2O3组和control siRNA组小管形成数目增加(P＜0.05)。(2)与Co-control组(27.78±1.35)相比，Co-As2O3组、Co-controlsiRNA组和Co-FOXO3a siRNA组小管形成数目(8.67±2.03，12.44±0.51，21.78±1.26)均减少(P＜0.05); Co-FOXO3a siRNA组较Co-As2O3组和Co-controlsiRNA组小管形成数目增加(P＜0.05)。4.ELISA结果:与control组相比，As2O3组和control siRNA组培养上清液中的VEGF含量均减少(P＜0.05);与As2O3组和control siRNA组相比，FOXO3a siRNA组培养上清液中的VEGF含量增加(P＜0.05)。 第二部分:1.western blot结果显示:(1) IKKβ激动剂TNF-α作用下IKKβ蛋白表达量增加，而FOXO3a蛋白表达量减少，经相关分析显示两者之间存在负性调节关系(r=-0.57，P＜0.05);(2)不同处理组FOXO3a蛋白与VEGF蛋白表达结果分析显示二者存在负性调节关系（r=-0.59，P＜0.05）;(3)给予IKKβ激动剂作用后VEGF蛋白表达量增加。2.RT-PCR结果与Western blot结果相符，证实各因子的表达在mRNA水平与蛋白水平相一致。 结论：1.FOXO3a转录因子参与了As2O3抑制肿瘤血管生成过程。2.As2O3能通过下调IKKβ的表达而上调FOXO3a因子的表达。3.As2O3可以通过上调FOXO3a因子的表达使VEGF因子的表达下调。4.综上考虑，As2O3可能通过IKKβ-FOXO3a-VEGF信号通路而抑制肿瘤血管的生成。
三氧化二砷;血管生成;分子机制;胃癌;信号通路
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
病理学与病理生理学
柳红
2013
中文
R735.2
78
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）