MMP-28与椎间盘退变关系的研究
目的：椎间盘退变的原因很多，基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinasesMMPs)表达量增加被认为是导致椎间盘退交的主要机制之一。有关MMPs与椎间盘退变之间的关系一直是研究热点，然而MMPs家族的最新成员MMP-28与椎间盘退变的关系国内外却鲜有报道。本实验通过检测MMP-28在正常与不同退变等级的椎间盘中的表达，研究MMP-28与椎间盘退变的关系。研究表明细胞因子如IL-1β、TNF-α参与椎间盘退变，且可以调控MMPs表达，本实验将体外培养的人体髓核细胞与IL-1β、TNF-α共培养，检测MMP-28mRNA转录水平，探讨IL-1β、TNF-α对髓核细胞的MMP-28是否具有调控作用。 方法：收集2012年4月-2012年12月期间在徐州医学院附属医院手术的腰椎间盘突出症患者的髓核标本30例为退变组，同期手术的胸腰段骨折患者的髓核标本10例为对照组，将标本根据Pfirrman分级分为五级，按突出程度分为突出型和脱出型，应用免疫组织化学染色法检测髓核标本中MMP-28的表达，记录染色阳性率并进行分级，采用等级秩和检验、Mann-Whitney U法进行统计学分析，同时采用Spearman等级相关分析法分析椎间盘退变等级与MMP-28表达强度的相关性。应用RT-PCR法检测髓核组织MMP28mRNA的转录水平，并采用独立样本t检验分析比较退变组和对照组、突出组和脱出组中转录水平的差异。培养人体正常髓核细胞，将三个不同浓度的IL-1β(0ng/ml、10ng/ml、50ng/ml)和三个不同浓度的TNF-α(0ng/ml、50ng/ml、100ng/ml)分别与体外扩增的第三代髓核细胞联合培养72h，RT-PCR法测定MMP-28mRNA的转录水平，采用单因素方差分析法比较转录水平的差异。 结果：30例退变髓核组织中有26例检测到MMP-28表达，阳性率等级分布为（-）4例、(+)5例、(++)7例、（+++）8例、（++++）6例，10例对照组中仅有2例检测到MMP-28表达，阳性率等级分布为（-）8例、(+)1例、(++)1例，MMP-28在对照组和实验组中的表达差异有统计学意义(P＜0.01)。椎间盘退变等级分布为:Ⅱ级6例、Ⅲ级9例、Ⅳ级8例、Ⅴ级7例，MMP-28表达与椎间盘退变等级呈中度正相关(rs=0.670，P＜0.01)。15例突出髓核组织中有12例检测到MMP-28表达，阳性率等级分布为（-）3例、(+)4例、(++)4例、（+++）3例、(++++)1例，15例脱出髓核组织中有14例检测到MMP-28表达，阳性率等级分布为（-）1例、(+)1例、(++)3例、（+++）5例、（++++）5例，MMP-28在突出组和脱出组中的表达差异有统计学意义(P＜0.01)。退变组mRNA转录水平(0.627±0.125)较对照组(0.401±0.065)显著升高，两组间差异有统计学意义(P＜0.01)，同时发现脱出组MMP-28mRNA转录水平(0.698±0.988)较突出组(0.556±0.108)显著升高，两组间差异有统计学意义(P＜0.01)。 不同浓度(0ng/ml、10ng/ml、50ng/ml)的IL-1β与髓核细胞共培养72小时后，各组间MMP-28mRNA转录水平(0.325±0.019、0.343±0.018、0.343±0.018)无统计学差异(P＞0.05)。不同浓度(0ng/ml、50ng/ml、100ng/ml) TNF-α与髓核细胞共培养72小时后，各组间MMP-28mRNA转录水平(0.325±0.019、0.515±0.02、0.610±0.012)有统计学差异(P＜0.01)，且高浓度组MMP28 mRNA转录水平较低浓度组明显升高(P＜0.01)。 结论：1、MMP-28在退变髓核组织中表达增高，与椎间盘退变等级之间存在正相关。2、IL-1β对正常人体髓核细胞MMP-28转录无调控作用，而TNF-α可以上调MMP-28mRNA转录水平，且呈浓度依赖性。
椎间盘退变;免疫组化;基质金属蛋白酶;细胞因子
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
骨科学
冯虎
2013
中文
R681.53
61
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）