TRPC6介导BDNF通路在糖尿病大鼠神经病理性痛发生中的作用及其机制研究
目的:流行病学表明,约60%糖尿病患者并发糖尿病神经病变,以糖尿病神经病理性痛(Diabetic Neuropathic Pain,DNP)最为常见。DNP是临床最常见的神经病理性疼痛类型之一,可出现自发痛、痛觉过敏、触诱发痛和其他不典型感觉异常,严重影响患者生活质量。理想的治疗方法和药物开发依赖于对DNP发生机制的认识。研究表明,脑源性神经营养因子(Brain Derived Neurophic Factor, BDNF)/TrkB系统及其对胞内Ca2+浓度的调节参与不同原因所致的痛觉过敏的形成和发展,但详细机制仍不清楚。我们的预实验发现,在DNP大鼠中,经典瞬时受体电位离子通道6(TRPC6)对机械性痛敏发挥调节作用,这种作用也可能和DRG神经元内Ca2+浓度改变密切相关。因此,我们提出并探讨TRPC6介导BDNF通路对神经元内Ca2+浓度调节,参与DNP大鼠机械性痛敏形成的作用和可能机制。 方法:应用Von Frey细丝测量大鼠机械性痛觉阈值;应用免疫荧光技术检测脊髓和背根神经节中BDNF和TRPC6的表达;应用Western blot技术检测大鼠脊髓和背根神经节BDNF和TRPC6的表达;运用钙离子成像技术检测大鼠DRG神经元中Ca2+浓度的变化。 结果:1 STZ诱导DNP模型大鼠机械性痛觉阈值在注射STZ(60mg/kg)后逐渐降低,与正常对照组相比,21天左右降幅最大(P<0.001)。Western blot结果显示,分别在注射STZ后第7天,14天,21天和28天取材的DRG和脊髓中,与正常对照组大鼠相比,BDNF和TRPC6蛋白表达增加,与正常对照组相比,21天达到峰值(P<0.01)。免疫荧光结果表明在DNP模型大鼠的DRG神经元和脊髓背角浅层中BDNF和TRPC6表达均较正常对照组增加(P<0.05)。2鞘内注射酪氨酸激酶受体抑制剂K252a(200ng/10ul)和扣压BDNF的TrkB-Fc(200ng/10ul)分别非特异和特异性抑制BDNF通路,DNP大鼠的机械性痛觉阈值较DNP+溶媒组明显升高(P<0.01),正常大鼠阈值无明显变化。鞘内注射非选择性牵张激活阳离子通道抑制剂GsMTX-4(100ng/10ul)和TRPC通道抑制剂BTP2(5ug/10ul)非特异抑制TRPC6通道后,DNP大鼠的机械性痛觉阈值较DNP+溶媒组升高(P<0.05),正常大鼠阈值无明显变化。鞘内注射TRPC6的反义寡核酸AS ODN(10ng/10ul/天,X3天),特异性抑制TRPC6通道,DNP大鼠的机械性痛觉阈值较DNP+MM组显著升高(P<0.05),正常大鼠阈值无明显变化,同时Western blot结果显示在正常和DNP大鼠的DRG和脊髓中,反义寡核酸敲除TRPC6后,TRPC6的表达均减少(P<0.05)。3正常大鼠鞘内注射TRPC6的AS ODN(10ng/10ul/天,X3天)抑制TRPC6后再鞘内给予BDNF(20ng/10ul),大鼠机械性痛觉阈值较Control+AS+PBS组明显降低(P<0.05),而在DNP大鼠DNP+AS+BDNF组和DNP+AS+PBS组机械性痛觉阈值则均明显升高,差异无统计学意义(P>0.05)。4钙离子成像技术显示,正常和DNP大鼠急性分离的DRG神经元,应用BDNF(20ng/2ul),Ca2+浓度明显升高。而BDNF刺激经反义寡核酸敲除过TRPC6通道的DNP大鼠的DRG神经元,Ca2+浓度变化不大。正常大鼠予以相同处理后Ca2+浓度明显升高。 结论:TRPC6通道介导了BDNF信号系统参与的糖尿病神经病理性痛机械性痛敏的形成。
糖尿病;神经病理性痛;机械性痛敏;生活质量;动物模型
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
麻醉学
曹君利
2013
中文
R587.2;R441.1
67
2014-02-25(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)