脊髓水平mLin10-PDZ1结构域在小鼠骨癌痛维持中的作用
目的:探讨鞘内单次注射nLin10-PDZ1结构域小肽抑制剂对骨癌痛小鼠的痛行为的影响以及脊髓水平mLin10-PDZ1结构域在小鼠骨癌痛维持中的作用。 方法:124只雄性C3H/HeJ小鼠按随机数字表法随机分为正常组(N组,n=3)、假手术组(S组,n=17)和肿瘤组(T组,n=104)。将含2×105个NCTC2472纤维肉瘤细胞的最小必需培养基(α-MEM)接种到T组小鼠右侧股骨远端骨髓腔内,制作骨癌痛模型;S组小鼠骨髓腔内注入不含肿瘤细胞的α-MEM;正常组小鼠不做任何处理。T组及S组于接种前1d、接种后3d、5d、7d、10d、14 d测定痛行为学指标:自发性抬足次数、机械痛缩足阈值(PWMT)。T组小鼠在接种后14 d,进一步随机分为溶媒组(C组,n=14)、mLin10-PDZ1结构域小肽抑制剂Myr-RC-13组(R组,n=36)及其同分异构体小肽Myr-WP-13组(W组,n=36)。R组按照不同药物剂量进一步分为R1(n=8)、R2组(n=8)、R3组(n=20),分别鞘内注射小肽Myr-RC-132.5μg、5μg、10μg;W组按照不同药物剂量进一步分为W1组(n=8)、W2组(n=8)、W3组(n=20),分别鞘内注射Myr-WP-132.5μg、5μg、10μg。小肽均溶于10%二甲基亚砜(DMSO),S组和C组鞘内注射溶媒10% DMSO。注射体积均为5μl。在给药后的2h、12h、24 h分别测定各组小鼠的痛行为学指标。在第14 d给药前,取正常组、S组及T组小鼠脊髓腰膨大L3-5节段采用免疫共沉淀检测KIF17与mLin10相互作用。在给药后2h,C组、W3及R3组小鼠取脊髓腰膨大L3-5节段进行免疫共沉淀检测KIF17与mLin10相互作用。选取接种前1d、接种后5d、7d、10d、14d和给药后2h、12h、24 h的小鼠取L3-5节段脊髓腰膨大保存于-80℃冰箱,采用western blot方法检测脊髓KIF17与NR2B蛋白表达水平。 结果:(1)痛行为学变化:①与S组和术前基础值相比,T组小鼠在接种肿瘤细胞后第7d出现PWMT明显下降[(1.25±0.21)g,F=12.11,P<0.01],自发性抬足次数明显增加[(4.38±0.98), F=27.70,P<0.01],并随时程变化逐渐明显,于术后14d其PWMT值降低至[(0.42±0.07)g,F=260.986,P<0.01],自发抬足次数增加至[(13.46±1.44),F=117.473,P<0.01]。②鞘内给予小肽Myr-RC-13后2h,与C组比较,R1、R2和R3组PWMT增高[(0.70±0.18)g,(0.85±0.21)g,(1.25±0.21)g,F=62.184,P<0.01],自发性抬足次数减少[(10.40±1.52),(9.28±1.36),(7.55±0.67),F=59.807,P<0.01], R3组较R1和R2组有统计学差异(P<0.01),但各组均未能恢复至假手术组水平。至12h,与C组相比,R2和R3组PWMT值[(0.7±0.18)g,(1.05±0.33)g,F=82.641,P<0.01]有显著统计学差异,R3组自发抬足次数减少[(9.53±1.40),P<0.01];而R1组各痛行为学变化无统计学差异(P>0.05)。在给药后24 h,R组各组小鼠PWMT值及自发抬足次数与S组、C组相比则无统计学差异(P>0.05)。而鞘内给予同分异构体Myr-WP-13,与C组相比,在各时间点小鼠痛行为无变化(P>0.05)。 (2) western blot结果示:与S组相比,从接种后第5d开始,T组小鼠KIF17和NR2B表达水平增高。鞘内给予Myr-RC-13后2h,12h、24 h,R3组脊髓L3-5节段NR2B及KIF17蛋白水平均较S组及C组明显下降(P<0.05),而W3组则与给药前无明显变化(P>0.05)。Co-immunoprecipitation结果显示,与正常组及S组小鼠比较,肿瘤组小鼠mLin10与KIF17相互作用增强(P<0.05),鞘内注射小肽Myr-RC-13可以减少这种相互作用(P<0.05)。 结论:鞘内单次注射mLin10-PDZ1结构域小肽抑制剂Myr-RC-13能够改善骨癌痛小鼠的痛行为,脊髓水平mLin10-PDZ1结构域可能在骨癌痛的发生和维持中起重要作用。
小肽抑制剂;骨癌痛;动物模型;脊髓水平
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
麻醉学
马正良
2013
中文
R738.1
61
2014-02-25(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)