脊髓水平mLin10-PDZ1结构域在小鼠骨癌痛维持中的作用
目的：探讨鞘内单次注射nLin10-PDZ1结构域小肽抑制剂对骨癌痛小鼠的痛行为的影响以及脊髓水平mLin10-PDZ1结构域在小鼠骨癌痛维持中的作用。 方法：124只雄性C3H/HeJ小鼠按随机数字表法随机分为正常组（N组，n=3）、假手术组(S组，n=17)和肿瘤组(T组，n=104)。将含2×105个NCTC2472纤维肉瘤细胞的最小必需培养基(α-MEM)接种到T组小鼠右侧股骨远端骨髓腔内，制作骨癌痛模型;S组小鼠骨髓腔内注入不含肿瘤细胞的α-MEM;正常组小鼠不做任何处理。T组及S组于接种前1d、接种后3d、5d、7d、10d、14 d测定痛行为学指标:自发性抬足次数、机械痛缩足阈值(PWMT)。T组小鼠在接种后14 d，进一步随机分为溶媒组(C组，n=14)、mLin10-PDZ1结构域小肽抑制剂Myr-RC-13组(R组，n=36)及其同分异构体小肽Myr-WP-13组(W组，n=36)。R组按照不同药物剂量进一步分为R1(n=8)、R2组(n=8)、R3组(n=20)，分别鞘内注射小肽Myr-RC-132.5μg、5μg、10μg;W组按照不同药物剂量进一步分为W1组(n=8)、W2组(n=8)、W3组(n=20)，分别鞘内注射Myr-WP-132.5μg、5μg、10μg。小肽均溶于10％二甲基亚砜(DMSO)，S组和C组鞘内注射溶媒10％ DMSO。注射体积均为5μl。在给药后的2h、12h、24 h分别测定各组小鼠的痛行为学指标。在第14 d给药前，取正常组、S组及T组小鼠脊髓腰膨大L3-5节段采用免疫共沉淀检测KIF17与mLin10相互作用。在给药后2h,C组、W3及R3组小鼠取脊髓腰膨大L3-5节段进行免疫共沉淀检测KIF17与mLin10相互作用。选取接种前1d、接种后5d、7d、10d、14d和给药后2h、12h、24 h的小鼠取L3-5节段脊髓腰膨大保存于-80℃冰箱，采用western blot方法检测脊髓KIF17与NR2B蛋白表达水平。 结果：(1)痛行为学变化:①与S组和术前基础值相比，T组小鼠在接种肿瘤细胞后第7d出现PWMT明显下降[(1.25±0.21)g，F=12.11，P＜0.01]，自发性抬足次数明显增加[(4.38±0.98), F=27.70，P＜0.01]，并随时程变化逐渐明显，于术后14d其PWMT值降低至[(0.42±0.07)g，F=260.986，P＜0.01]，自发抬足次数增加至[(13.46±1.44)，F=117.473，P＜0.01]。②鞘内给予小肽Myr-RC-13后2h，与C组比较，R1、R2和R3组PWMT增高[(0.70±0.18)g，(0.85±0.21)g，(1.25±0.21)g，F=62.184，P＜0.01]，自发性抬足次数减少[(10.40±1.52)，(9.28±1.36)，(7.55±0.67)，F=59.807，P＜0.01]， R3组较R1和R2组有统计学差异(P＜0.01），但各组均未能恢复至假手术组水平。至12h，与C组相比，R2和R3组PWMT值[(0.7±0.18)g，(1.05±0.33)g，F=82.641，P＜0.01]有显著统计学差异，R3组自发抬足次数减少[(9.53±1.40)，P＜0.01];而R1组各痛行为学变化无统计学差异(P＞0.05）。在给药后24 h，R组各组小鼠PWMT值及自发抬足次数与S组、C组相比则无统计学差异（P＞0.05）。而鞘内给予同分异构体Myr-WP-13，与C组相比，在各时间点小鼠痛行为无变化（P＞0.05）。 (2) western blot结果示:与S组相比，从接种后第5d开始，T组小鼠KIF17和NR2B表达水平增高。鞘内给予Myr-RC-13后2h，12h、24 h，R3组脊髓L3-5节段NR2B及KIF17蛋白水平均较S组及C组明显下降(P＜0.05），而W3组则与给药前无明显变化(P＞0.05）。Co-immunoprecipitation结果显示，与正常组及S组小鼠比较，肿瘤组小鼠mLin10与KIF17相互作用增强(P＜0.05），鞘内注射小肽Myr-RC-13可以减少这种相互作用(P＜0.05）。 结论：鞘内单次注射mLin10-PDZ1结构域小肽抑制剂Myr-RC-13能够改善骨癌痛小鼠的痛行为，脊髓水平mLin10-PDZ1结构域可能在骨癌痛的发生和维持中起重要作用。
小肽抑制剂;骨癌痛;动物模型;脊髓水平
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
麻醉学
马正良
2013
中文
R738.1
61
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）