MMP-26、TIMP-4与椎间盘退变关系的研究
目的：1、检测并分析基质金属蛋白酶-26(matrimetalloproteinases-26，MMP-26)和基质金属蛋白酶抑制剂-4(tissue inhibitor of metalloproteinase-4，TIMP-4)在退变和正常髓核组织中的表达，探讨两者与椎间盘退变的关系。2、将体外培养、扩增的人髓核细胞与TGF-β1共培养，以初步探讨TGF-β1对体外扩增的人髓核细胞中MMP-26、TIMP-4表达的影响。 方法：1、收集2012年4月-2012年12月期间在徐州医学院附属医院手术的腰椎间盘突出症患者的髓核标本30例为实验组，同期手术的胸腰段骨折患者的髓核标本10例为对照组，将标本根据Pfirrman分级分为五级，应用免疫组织化学法检测髓核标本中MMP-26和TIMP-4的表达，分别记录两者的染色阳性情况并进行分级，采用等级秩和检验Mann-Whitney U法分别对两者在实验组与对照组的表达进行比较，同时采用Spearman等级相关分析方法分析椎间盘退变等级与MMP-26和TIMP-4表达强度的相关性，以及MMP-26与TIMP-4在实验组中表达强度的相关性。2、应用RT-PCR法检测MMP-26、TIMP-4mRNA的转录水平并计算MMP-26mRNA与TIMP-4mRNA的比值，分别采用独立样本t检验分析三者在实验组和对照组中的差异。3、培养并传代人髓核细胞，将TGF-β1分四个不同浓度（0ng/ml，3ng/ml,10ng/ml，30ng/ml）与体外扩增的第三代人髓核细胞联合培养72h，RT-PCR法测定MMP-26、TIMP-4mRNA的转录水平，采用单因素方差分析转录水平的差异。 结果：1、30例退变髓核组织中有26例检测到MMP-26表达，MMP-26阳性等级为(-)4例、(+)9例、(++)10例、(+++)7例，27例检测到TIMP-4表达，TIMP-4阳性等级为(-)3例、(+)11例、（++）11例、（+++）5例;10例对照髓核组织中有2例检测到MMP-26表达，3例检测到TIMP-4表达，两者在对照组和实验组中的表达差异均有统计学意义（U值分别为33.000和47.000，P均＜0.01）。MMP-26及TIMP-4的表达强度均与椎间盘退变等级呈中度正相关(相关系数分别为0.615和0.534，P均＜0.01); MMP-26与TIMP-4在实验组的表达强度呈中度正相关（相关系数为0.648，P＜0.01）。2、退变髓核组织中的MMP-26、TIMP-4mRNA转录水平均高于对照组（t值分别为-14.826和-9.198，P均＜0.01），同时实验组的MMP-26mRNA/TIMP-4mRNA比值大于对照组（t值为-6.934，P＜0.01），表明MMP-26增加幅度较TIMP-4大。3、MMP-26mRNA和TIMP-4mRNA在联合不同浓度TGF-β1培养的髓核细胞中相对转录水平的比较:空白组和低浓度组的转录水平差异无统计学意义（P均＞0.05）;中等浓度组、高浓度组与空白组转录水平的差异均明显有统计学意义，且随着浓度的增加MMP26mRNA的转录水平下降而TIMP-4mRNA的转录水平上升（P均＜0.01）。 结论：1、MMP-26和TIMP-4在退变的髓核组织中表达均增高，但是MMP-26增高的幅度大于TIMP-4。2、MMP-26及TIMP-4的表达强度与椎间盘退变等级均成中度正相关，同时在退变髓核组织中MMP-26与TIMP-4的表达强度成中度正相关。3、适当浓度的TGF-β1可以下调髓核细胞MMP-26 mRNA的转录水平，同时上调TIMP-4 mRNA的转录水平。
免疫组化;椎间盘退变;基质金属蛋白酶-26;人髓核细胞;基质金属蛋白酶抑制剂
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
骨科学
冯虎
2013
中文
R681.53
59
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）