PKD2调控GOLPH3对脑胶质瘤细胞增殖的作用及其机制的研究
目的:探讨PKD2与GOLPH3促进胶质瘤细胞增殖的具体机制,为胶质瘤的分子靶向治疗提供潜在的靶点。 方法:1.运用Western blot(WB)检测非肿瘤脑组织及不同级别胶质瘤组织中Protein kinase D2(PKD2)与GOLPH3的蛋白水平,分析PKD2与GOLPH3在脑胶质瘤发生的相关性。2.运用亚克隆技术构建PKD2-pEGFP-N1质粒3.在体外培养的U251胶质瘤细胞中通过PolyJetTM和LipofectamineTM-2000分别转染PKD2过表达质粒和siRNA,运用WB检测过表达和干扰效果;CCK-8法和EdU法检测细胞增殖情况。4.在U251胶质瘤细胞中通过LipofectamineTM-2000分别转染GOLPH3过表达质粒和siRNA,运用WB检测过表达和干扰效果,CCK-8法和EdU法检测细胞增殖情况。5.在U251胶质瘤细胞中干扰和过表达PKD2后用WB检测GOLPH3、p-AKT、AKT的蛋白水平。6.在U251胶质瘤细胞中干扰GOLPH3后用WB检测PKD2、p-AKT、AKT蛋白水平。7.在U251胶质瘤细胞中过表达PKD2同时下调GOLPH3,应用WB检测共转体系,EdU法和CCK-8法检测细胞增殖情况。 结果:1.在人脑胶质瘤手术标本中,PKD2和GOLPH3表达水平明显高于非肿瘤脑组织,并且随胶质瘤级别的增高其蛋白表达水平也增加,差异有统计学意义(P<0.01 P<0.05),并且PKD2和GOLPH3在胶质瘤中表达呈正相关性(P<0.05)2.在U251细胞中下调PKD2或GOLPH3后细胞增殖能力明显下降,过表达PKD2或GOLPH3产生相反的结果。3.下调或过表达PKD2,GOLPH3,p-AKT的蛋白水平分别减少和增加。4.下调GOLPH3,PKD2蛋白水平不变,p-AKT的蛋白水平减少。5.过表达PKD2同时下调GOLHP3后,U251细胞增殖能力与对照组相比没有统计学意义(P>0.05)。 结论:1.PKD2和GOLPH3在脑胶质瘤组织中高表达,并且成正相关性。2.在U251胶质瘤细胞中,PKD2促进GOLPH3的表达,并活化AKT,促进细胞的增殖。
脑胶质瘤;细胞增殖;分子靶向治疗
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
外科学
于如同
2013
中文
R739.41
67
2014-02-25(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)