HugL-1对人脑胶质瘤U251细胞形态及迁移作用的研究
目的：探讨Hugl-1对胶质瘤细胞侵袭迁移的影响及其机制，为胶质瘤的分子靶向治疗提供潜在的靶点。 方法：1.使用PolyJetTM体外DNA转染试剂转染pEGFP-C1和pEGFP-C1-Hugl-1真核表达载体，结合G418筛选法，建立稳定表达GFP和Hugl-1的胶质瘤U251细胞株，用WB检测其稳定表达效果;2.通过划痕及Transwell实验检测稳定表达GFP与稳定表达Hugl-1的U251细胞株的细胞迁移变化。3.通过WB检测稳定表达GFP与稳定表达Hugl-1的U251细胞株中N-cadherin、E-cadherin、β-catenin表达量的改变。4.通过WB及GST-Pulldown实验检测稳定表达GFP与稳定表达Hugl-1的U251细胞株中Rac1的总量及活性形式的量的改变。5.WB检测无血清饥饿24h后稳定表达GFP的U251细胞株与稳定表达Hugl-1的U251细胞株中Rac1的总量及活性形式的量的改变。6.通细胞贴壁实验检测细胞贴壁能力的改变。7.细胞传代贴壁3h、6h后提取蛋白，通过WB及GST-Pulldown实验检测Rac1活性量改变及N-cadherin总量的改变。8.免疫荧光标记鬼笔环肽检测细胞饥饿24小时后给予血清刺激时间的不同观察应力纤维和板状伪足量的改变。 结果：1.成功构建了稳定表达GFP和Hugl-1的胶质瘤U251细胞株;2.划痕实验显示稳定表达Hugl-1的胶质瘤U251细胞株细胞迁移数目高于对照组（P＜0.01），Transwell迁移实验显示稳定表达Hugl-1的胶质瘤U251细胞株穿过滤膜的细胞数目高于对照组（P＜0.01）;3.WB检测显示:与对照组相比，稳定表达Hugl-1的胶质瘤U251细胞E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、Rac1表达水平无显著性差异（P＞0.05）。4.GST-Pulldown实验检测显示稳定表达Hugl-1的胶质瘤U251细胞株中Rac1的活性与对照组之间无显著性差异（P＞0.05）。5.经24h饥饿处理后稳定表达Hugl-1的胶质瘤U251细胞株Rac1的活性较对照组增强，且有显著性差异(P＜0.01)。6.细胞重新消化后稳定表达Hugl-1的胶质瘤U251细胞株贴壁速度比对照组快。分别提取细胞贴壁后3h、6h的蛋白，WB结果显示:与对照组相比，稳定表达Hugl-1的胶质瘤U251细胞株N-cadherin表达水平较对照组降低，且有显著性差异(P＜0.01)。7.免疫荧光染鬼笔环肽，细胞饥饿24h后给予血清刺激时间的不同观察应力纤维和板状伪足量的改变，稳定表达Hugl-1的胶质瘤U251细胞株较对照组细胞中应力纤维消失的速度及板状伪足出现的速度快。 结论：1.在无血清环境中，Hugl-1可能通过增加Rac1活性量，从而促进神经胶质瘤细胞的迁移;2.Hugl-1可以通过降低N-cadherin的表达水平来提高了胶质瘤细胞的贴壁能力，抑制了细胞间的粘附能力。3.Hugl-1可能通过促进Rac1的活化及降低N-cadherin的表达水平来调节骨架蛋白的重构。
细胞迁移;神经钙粘素;骨架蛋白;板状伪足;脑胶质瘤U;分子靶向治疗
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
神经外科学
郭克勤;于如同
2013
中文
R739.41
60
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）