BNIP3下调预处理对大鼠缺血再灌注后PARP-1表达的影响
目的：探讨BNIP3对缺血再灌注大鼠脑组织中PARP-1表达的影响，及二者在坏死性凋亡中的作用关系。 方法：1、将96只雄性SD大鼠(250g±30g)随机分为假手术组、MCAO组、慢病毒阴性对照+MCAO（空/MCAO）组、慢病毒阳性+MCAO(阳性/MCAO)组，每组各24只;2、前两组不予预处理，后两组分别进行预处理如下:1）空/MCAO组侧脑室注射对照空病毒，2）阳性/MCAO组给予BNIP3干扰序列的包装慢病毒;4d后，用假手术组制做对照模型，MCAO组、空/MCAO组、及阳性/MCAO组的大鼠进行大脑中动脉缺血处理，2h后再灌注，按再灌注不同时间点(12h、24h、48h和随72h)分为4个亚组（每组n=6），分别进行神经功能评分;3、于再灌注后的不同时间点使用Western blot方法对缺血脑组织的BNIP3、PARP-1的表达水平进行检测;并使用RT-PCR方法检测BNIP3-mRNA、PARP-1-mRNA的表达水平;4、缺血再灌注后24小时，分别取MCAO组及阳性/MCAO组的缺血半暗带区脑组织，大小约1 mm3，经系列脱水、置换、包埋、聚合、修块、切片等步骤，使用电镜观察、拍照。 结果：1、NSS评分:MCAO组及阳性/MCAO组在12h、24h、48 h、72 h等时间点NSS评分均高于假手术组，且差异有统计学意义（P＜0.05）;但MCAO组与阳性/MCAO组相比，各时点NSS评分的差异无统计学意义(P＞0.05)。 2、Western blot结果显示:BNIP3在脑缺血再灌注后72h内表达呈逐渐增长趋势;MCAO组BNIP3在12h、24h、48h及72h等时间点表达量均明显高于阳性/MCAO组的相应时间点，差异有统计学意义(P＜0.05);在缺血再灌注24h时间点，BNIP3的表达量在MCAO组明显高于假手术组，而阳性/MCAO组较MCAO组表达量减低，差异均有统计学意义(P＜0.05); MCAO组同空/MCAO组比较，差异不具有统计学意义(P＞0.05); PARP-1的表达在MCAO组各时间点均较假手术组有不同程度的增高，差异均具有统计学意义(P＜0.05)，且在再灌注后24h达峰值，之后逐渐减低。再灌注24小时时间点可以发现，MCAO组PAPR-1的表达量较假手术组明显升高，而在阳性/MCAO组，PARP-1的表达量较MCAO组有明显减低，差异均有统计学意义（P＜0.05）。 3、RT-PCR结果显示:再灌注后，BNIP3在MCAO组表达量逐渐增高，而在阳性/MCAO组表达量无增高趋势，且与MCAO组相比，在12h、24h、48h及72h等时间点的表达量均有不同程度减少，差异均有统计学意义(P＜0.05);在缺血再灌注后24h时间点，MCAO组与空/MCAO组缺血半暗带脑组织均有PARP-1的表达，二者比较差异无统计学意义(P＞0.05);阳性/MCAO组表达量则出现明显降低，与MCAO组及空/MCAO组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)。 4、电镜观察结果表明:缺血再灌注后24h后核膜形态发生改变，核固缩，空泡样疏松化;阳性/MCAO组各时间点细胞形态基本完整，核膜无增厚。 结论：1、慢病毒包装干扰RNA可下调大鼠缺血脑组织中BNIP3的表达，且对损伤有一定的保护作用。 2、BNIP3的表达水平被下调的同时，相同区域内PARP-1的表达也有明显的降低。 3、下调的BNIP3对脑缺血的保护作用可能与其减少PARP-1的降解，从而减少细胞的坏死性凋亡有关。
脑缺血再灌注;BNIP3基因;细胞凋亡;DNA修复酶
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
神经病学
耿德勤
2013
中文
R743.3;R741.02
57
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）