施保利通治疗小鼠巨细胞病毒感染的疗效观察及其机制的研究
目的：观察施保利通治疗小鼠巨细胞病毒感染的疗效并探讨其机制。 方法：4周龄SPF级雌性BALB/c小鼠，腹腔接种含病毒5×103PFU的病毒液，建立急性全身播散性感染模型，随机分为模型对照组、施保利通治疗组、GCV治疗组及施保利通、GCV联合治疗组。另设正常对照组，腹腔注射等容积NS。以接种日为0天，接种后24h起，正常对照组及模型对照组腹腔注射NS，灌服NS;施保利通治疗组腹腔注射NS，灌服施保利通550mg/kg; GCV治疗组腹腔注射GCV60mg/Kg，灌服NS;联合治疗组腹腔注射GCV60mg/Kg，灌服施保利通550mg/kg。药物均以NS为溶媒，腹腔注射容积为0.01ml/10g，灌胃容积为0.2ml/10g，每天1次，共14天。监测小鼠的生长发育情况及体重变化，并于给药第3、5、7、10、14天末各组分别随机处死小鼠5只。半定量PCR法检测第7天时模型对照组和正常对照组小鼠肺、肝、脾、肾、心等组织中MCMV-DNA;HE染色观察各脏器病理改变;CPE法检测唾液腺MCMV感染性病毒滴度;荧光实时定量PCR法检测肺、肝组织MCMV-DNA负荷量;双抗体夹心ELISA法检测脾细胞培养上清IFN-γ、IL-10表达水平;RT-PCR法检测脾组织T-bet mRNA、GATA-3 mRNA表达强度。 结果：1.联合治疗组与正常对照组小鼠生长发育良好，施保利通治疗组及GCV治疗组小鼠稍落后，模型对照组明显落后。第14天时各组小鼠体重比较:联合治疗组和正常对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05)，模型对照组＜施保利通治疗组＜GCV治疗组＜联合治疗组，差异有统计学意义（F=57.41，P＜0.01）。 2.第7天，模型对照组小鼠肺、肝、脾、肾、心等组织MCMV-DNA PCR检测出现阳性条带，HE染色可见重要脏器出现相应的组织病理损害;正常对照组未出现阳性条带，未见相应病理改变。 3.唾液腺MCMV感染性病毒滴度检测:正常对照组小鼠各时间点检测呈阴性，其余各组于病毒接种后5天即可检测到MCMV。模型对照组病毒滴度逐渐升高，14天达高峰。其余各组先迅速升高，7天后施保利通治疗组未再有明显变化，GCV治疗组及联合治疗组降低，14天时施保利通治疗组明显低于模型对照组，但较GCV治疗组高，差异有统计学意义（F=117.54，P＜0.05），联合治疗组检测呈阴性。各组病毒滴度峰值比较，施保利通治疗组略高于GCV治疗组，差异无统计学意义(P＞0.05)，均低于模型对照组，高于联合治疗组，差异有统计学意义(F=45.06，P＜0.01)。 4.肺组织MCMV-DNA负荷量变化:正常对照组小鼠检测呈阴性，其余各组于接种病毒后3天可检测到较高水平MCMV-DNA，7天达高峰。各组峰值比较，施保利通治疗组略高于GCV治疗组，但差异无统计学意义（P＞0.05），均明显低于模型对照组，高于联合治疗组，差异有统计学意义(F=41.52，P＜0.01)。第14天病毒量比较，联合治疗组＜GCV治疗组＜施保利通治疗组＜模型对照组，差异有统计学意义(F=143.45，P＜0.01)。 5.肝组织MCMV-DNA负荷量变化:变化趋势与肺组织类似。各组峰值比较，施保利通治疗组低于模型对照组，差异无统计学意义(P＞0.05)，均高于GCV治疗组，显著高于联合治疗组，差异有统计学意义(F'=229.63，P＜0.01)。第14天病毒量比较，联合治疗组＜GCV治疗组＜施保利通治疗组＜模型对照组，差异有统计学意义(F'=908.29，P＜0.01)。 6.IFN-γ表达水平变化:各时间点正常对照组无明显变化;模型对照组和施保利通治疗组均于第3d达高峰，前者3天后逐渐降低，第14天与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，后者先迅速降低，7天后回升，第14天时明显高于模型对照组及正常对照组，差异有统计学意义(F=385.49，P＜0.05)。 7.IL-10表达水平变化:各时间点正常对照组无明显变化;模型对照组接种MCMV后逐渐升高，第14天时达到较高水平;施保利通治疗组先升高，第7天后下降，第14天明显低于模型对照组，但仍较正常对照组高，差异有统计学意义(F=523.67，P＜0.01)。 8.T-bet mRNA表达强度变化:变化趋势与IFN-γ表达水平类似，第14天时模型对照组与正常对照组差异无统计学意义(P＞0.05)，均低于施保利通组，差异有统计学意义(F=257.57，P＜0.05)。 9.GATA-3 mRNA表达强度变化:变化趋势与IL-10表达水平类似。第14天时模型对照组＞施保利通治疗组＞正常对照组，差异有统计学意义(F=1768，P＜0.05)。 结论：1.施保利通具有抗巨细胞病毒作用，与GCV联合用药具有相互协同作用。 2.巨细胞病毒感染可诱导幼年小鼠出现Th1/Th2漂移，表现为Th2细胞的优势应答状态。 3.施保利通可改善MCMV感染所诱发的Th1/Th2漂移状态，此作用可能为其抗巨细胞病毒机制之一。
巨细胞病毒;施保利通;抗病毒机制;疗效评价
徐州医科大学;徐州医学院
硕士
儿科学
王军
2013
中文
R511;R453
69
2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）